[發明專利]荔枝轉基因體系的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 202111274801.3
• 申請日: 2021-10-29
• 公開（公告）號: CN113930443B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 趙明磊;謝涵涵;李建國;徐珊珊
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/65;A01H5/06;A01H6/00
• 代理公司: 廣州市諾豐知識產權代理事務所(普通合伙) 44714
• 代理人: 任毅;黃國亮

1.一種荔枝轉基因體系的構建方法，包括以下步驟：

步驟a：荔枝種子消毒后于無菌培養基中培養獲得荔枝實生苗；

步驟b：活化農桿菌得到侵染用農桿菌菌液，所述農桿菌中攜帶有目的基因；

步驟c：使用注射器吸取所述農桿菌菌液創傷侵染荔枝實生苗的莖，然后避光靜置；

步驟d：恢復培養后荔枝實生苗上獲得到轉基因根；

其中，所述農桿菌中含有篩選質粒；所述篩選質粒中含有報告基因RUBY；所述報告基因RUBY由35S啟動子引導表達，所述農桿菌為Ar.Qual發根農桿菌。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述無菌培養基為1/2 MS培養基。

3.根據權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于，所述荔枝實生苗是指苗期為20-30天的荔枝實生苗。

4.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟b具體為：將含有目的基因的農桿菌加入TY液體培養基，于28℃振蕩培養2小時，離心重懸后，將菌液涂布在含有鏈霉素、卡那霉素的TY固體培養基上，28℃培養2天，挑單菌落于含有鏈霉素、卡那霉素和乙酰丁香酮的TY液體培養基中，28℃、220 rmp振蕩培養得到侵染用農桿菌菌液。

5.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述農桿菌菌液的OD₆₀₀值為0.5-0.7。

6.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，步驟d中恢復培養的環境條件為：溫度24-26℃，暗培養8 h，光照培養16 h。

7.權利要求1-6任一項所述的構建方法在荔枝品種選育及荔枝品種改良中的應用。