[發明專利]一種RF-RAA檢測鴨圓環病毒的引物和探針組合及其應用

在審

• 申請號: 202111263874.2
• 申請日: 2021-10-27
• 公開（公告）號: CN113846188A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 張鐵;李馨月;王春光;呂建存;王文靜;張宗淑;王超;翟向和;史萬玉
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 河北國維致遠知識產權代理有限公司 13137
• 代理人: 龐玉凈

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體公開一種RF?RAA檢測鴨圓環病毒的引物和探針組合及其應用。所述檢測鴨圓環病毒的引物和探針中，上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，探針的序列如SEQ ID NO:3所示。本發明針對DuCV的保守基序設計特異性引物和探針，建立了一種應用于檢測DuCV的RF?RAA方法，使擴增產物累積與熒光信號強弱呈正相關，在41℃下反應15min可經儀器觀察到明顯結果，且方法的特異性強、靈敏度高、最低檢測限可達1拷貝/μL，準確度好，對鴨圓環病毒的早期臨床檢測和流行病學調查提供了可靠保障，對疫病防控有積極意義。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，尤其涉及一種RF-RAA檢測鴨圓環病毒的引物和探針組合及其應用。

背景技術

鴨圓環病毒病(Duck circovirus disease，DuCVD)是一種由鴨圓環病毒(Duckcircovirus，DuCV)引起的傳染性疾病，各日齡和品種的鴨均可感染。DuCV最早于2003年被發現，隨后在世界多個國家陸續報道有感染病例。DuCV能夠侵害鴨子的免疫系統，引起免疫抑制，導致繼發感染或多重感染。發病鴨表現為脫毛、食欲不振、發育遲緩，嚴重者甚至出現呼吸困難、貧血、生產性能下降甚至死亡。

DuCVD的癥狀與某些細菌、真菌感染及一些營養性疾病的表現相似，臨床難以做出準確判斷，需要進行實驗室鑒別診斷。其中，常用的手段包括PCR、RFQ-RCR、酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)和環介導等溫擴增法(loop-mediatedisothermal amplification，LAMP)。但是，PCR需要高溫變性、低溫退火、適溫延伸的過程，因此無法擺脫熱循環儀器的使用；RFQ-PCR方法雖然靈敏度高、但儀器價格高昂；ELISA檢測抗體存在非特異性反應等問題；LAMP具有高度的特異性和敏感性，但引物設計復雜，且反應需在60-65℃條件下才能進行。因此，急需發展一種簡便、高特異性、靈敏且又不需要昂貴儀器、非專業人員可操作的DuCV快速檢測方法。

發明內容

針對現有檢測鴨圓環病毒的方法存在的耗時長、特異性差、靈敏度低以及需要特殊儀器的問題，本發明提供一種RF-RAA檢測鴨圓環病毒的引物和探針組合及其應用，利用該檢測鴨圓環病毒的引物和探針可在37-41℃恒溫條件下快速準確檢測鴨圓環病毒，且具有操作簡便、特異性好、靈敏度高等優勢，對DuCVD的防控具有積極意義。

為達到上述發明目的，本發明實施例采用了如下的技術方案：

一種RF-RAA檢測鴨圓環病毒的引物和探針組合，包括引物對和探針，所述引物對的序列如下：

上游引物DuCV-F:5′-CCGCTGACTGAGGTGGCCCGGAAGTTCCCC-3′(SEQ ID NO:1)，

下游引物DuCV-R:5′-AATTCAAATGCATAACGGCTCTTTCCGGTG-3′(SEQ ID NO:2)；

所述探針的序列為：

DuCV-T:5′-ATGTTATCTTTGGGCGTGGCCTGGAACGCCTCCGTCACCTGATCGTTGAG-3′(SEQID NO:3)。