[發明專利]一種RF-RAA檢測鴨圓環病毒的引物和探針組合及其應用

在審

• 申請號: 202111263874.2
• 申請日: 2021-10-27
• 公開（公告）號: CN113846188A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 張鐵;李馨月;王春光;呂建存;王文靜;張宗淑;王超;翟向和;史萬玉
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 河北國維致遠知識產權代理有限公司 13137
• 代理人: 龐玉凈

1.一種RF-RAA檢測鴨圓環病毒的引物和探針組合，其特征在于，包括引物對和探針，所述引物對的序列如下：

上游引物DuCV-F:5′-CCGCTGACTGAGGTGGCCCGGAAGTTCCCC-3′,

下游引物DuCV-R:5′-AATTCAAATGCATAACGGCTCTTTCCGGTG-3′；

所述探針的序列為：

DuCV-T:5′-ATGTTATCTTTGGGCGTGGCCTGGAACGCCTCCGTCACCTGATCGTTGAG-3′。

2.如權利要求1所述的引物和探針組合，其特征在于，所述探針上標記有熒光基團和淬滅基團。

3.如權利要求2所述的引物和探針組合，其特征在于，所述探針為：5′-ATGTTATCTTTGGGCGTGGCCTGGAACGCC/i6FAMdT//idSp/CG/iBHQ1dT/CACCTGATCGTTGAG-3′-spacer。

4.權利要求1-3任一項所述的引物和探針組合在非診斷性檢測鴨圓環病毒中的應用。

5.一種用于檢測鴨圓環病毒的試劑盒，其特征在于，包含權利要求1-3任一項所述的引物和探針組合。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，還包括基礎緩沖液、乙酸鎂溶液、RAA干粉試劑和去離子水。

7.利用權利要求5所述的試劑盒檢測鴨圓環病毒的方法，其特征在于，具體操作為：提取鴨圓環病毒的基因組DNA為模板，用所述試劑盒進行RAA擴增，并在擴增過程中進行實時熒光檢測。

8.如權利要求7所述的檢測鴨圓環病毒的方法，其特征在于：所述RAA擴增的體系包括以下試劑及用量：

9.如權利要求7所述的檢測鴨圓環病毒的方法，其特征在于：所述RAA擴增的反應溫度為37-42℃，反應時間為15-25min。

10.如權利要求9所述的檢測鴨圓環病毒的方法，其特征在于：所述RAA擴增的反應溫度為41℃，反應時間為15min。