[發明專利]靶向超敏廣譜溶瘤病毒制備及應用

有效

• 申請號: 202111259942.8
• 申請日: 2021-10-28
• 公開（公告）號: CN113699123B
• 公開（公告）日: 2022-01-25
• 發明（設計）人: 鐘莉娉
• 申請（專利權）人: 旦旦生物科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/86;C12N15/40;C12N15/56;C12N15/13;A61K35/768;A61K48/00;A61K38/47;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 上海德禾翰通律師事務所 31319
• 代理人: 夏思秋

1.一種包含重組新城疫病毒NDV-GHF質粒的重組病毒，其特征在于，所述重組病毒由重組新城疫病毒NDV-GHF質粒與輔助質粒共轉染BSR細胞拯救獲得；所述重組新城疫病毒NDV-GHF質粒是將新城疫病毒NDV與α-1,3 GT、HPSE和FAP scFv基因進行重組后的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒；所述輔助質粒選自輔助質粒N、輔助質粒P和輔助質粒L。

2.如權利要求1所述的重組病毒，其特征在于，所述新城疫病毒NDV的基因序列見GenBank FJ766530.1；所述HPSE基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述FAP scFv基因的序列如SEQ ID NO:2所示；所述α-1,3 GT基因的序列如SEQ ID NO:3所示。

3.如權利要求1或2所述的重組病毒在制備融化腫瘤物理屏障的藥物中的應用。

4.重組新城疫病毒NDV-GHF質粒，其特征在于，在新城疫病毒NDV中重組包含α-1,3 GT、HPSE和FAP scFv基因的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒；所述重組新城疫病毒NDV-GHF質粒的載體是TVT/071204，所述α-1,3 GT、HPSE和FAP scFv基因插入的位點為Age I、SanD I。

5.如權利要求4所述的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒，其特征在于，所述HPSE基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述FAP scFv基因的序列如SEQ ID NO:2所示；所述α-1,3 GT基因的序列如SEQ ID NO:3所示。

6.如權利要求4或5所述的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒在構建包含重組新城疫病毒NDV-GHF質粒的重組新城疫病毒中的應用。

7.一種如權利要求1或2所述的重組病毒的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

步驟一、構建所述的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒；

步驟二、提取測序正確的所述的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒；

步驟三、BSR細胞復蘇、換液、傳代和鋪板；

步驟四、利用痘苗病毒感染BSR細胞，然后用所述步驟二中提取的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒對BSR細胞進行轉染；

步驟五、取所述步驟四轉染后的細胞上清接種到雞胚中，拯救病毒；

步驟六、從所述步驟五中的雞胚中收毒，檢測血凝效價，確認獲得重組病毒。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟一中，所述的重組新城疫病毒NDV-GHF質粒的構建方法包括以下步驟：

（1）線性化超敏NDV載體：用Age I和SanD I雙酶切超敏NDV骨架載體TVT/071204，回收載體大片段；

（2）擴增目的基因片段；所述目的基因的序列如SEQ ID NO:1~3所示；

（3）將所述步驟（1）回收的載體片段與所述步驟（2）的目的基因進行同源重組，連接產物轉化至TransStbl3感受態細胞，抽提質粒，通過PCR和Age I、SanD I雙酶切鑒定獲得陽性重組NDV質粒，命名為重組新城疫病毒NDV-GHF質粒。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述擴增中引物的序列如下所示：

PF：

CCCAAGGTCCAACTCTGTTTAAACTTAGAAAAAATACGGGTAGAAGTGCCACCGACCCCCGGGTCCGCCCG

PR：AGGATTGCCGCTTGGGTTTAAACTCATTTGATTTCCACTTTGGTCC。

10.一種靜脈注射制劑，其特征在于，所述靜脈注射制劑包括如權利要求1或2所述的重組病毒。

11.如權利要求1或2所述的重組病毒、或如權利要求10所述的靜脈注射制劑在制備新城疫病毒疫苗中的應用。