[發(fā)明專利]一種大蒜病毒的多重PCR檢測試劑盒

在審

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• 申請日: 2021-10-27
• 公開（公告）號: CN113981142A
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設計）人: 趙永強;劉燦玉;張碧薇;葛潔;楊青青;楊峰;樊繼德;陸信娟;史新敏;李勇
• 申請（專利權）人: 江蘇徐淮地區(qū)徐州農業(yè)科學研究所(江蘇徐州甘薯研究中心)
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 牛芳

本發(fā)明屬于植物病毒檢測技術領域，提供了一種大蒜病毒的多重PCR檢測試劑盒，包括SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5組引物對，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1~10所示。所述大蒜病毒為蔥潛隱病毒SLV、大蒜普通潛隱病毒GCLV、韭蔥黃條病毒LYSV、洋蔥黃矮病毒OYDV和青蔥X病毒屬Allexivirus病毒中的至少一種。本發(fā)明提供的大蒜病毒檢測試劑盒，能夠通過一次PCR反應同時檢測蔥潛隱病毒SLV、大蒜普通潛隱病毒GCLV、韭蔥黃條病毒LYSV、洋蔥黃矮病毒OYDV和青蔥X病毒屬病毒等12種侵染我國大蒜的病毒，提高了檢測效率，降低檢測成本。本發(fā)明所用引物特異性強、目的條帶大小分布合理，在保證檢測結果準確性的同時，能夠有效地鑒別侵染病毒的種類。

技術領域

本發(fā)明屬于植物病毒檢測技術領域，具體涉及一種檢測大蒜病毒的引物及其組成的試劑盒。

背景技術

大蒜是我國重要的傳統(tǒng)特色蔬菜和出口創(chuàng)匯蔬菜，占世界大蒜貿易總額的70%。大蒜屬于無性繁殖作物，只能通過分瓣或形成氣生鱗莖的方式進行無性繁殖，因此導致病毒病積累十分嚴重。張維等和明艷林等分別對黑龍江省和廈門市的大蒜病毒病發(fā)病情況進行了調查，發(fā)現(xiàn)大蒜均普遍受到病毒的復合侵染。2016年至2017年，發(fā)明人對江蘇徐州和河南部分地區(qū)大蒜病毒發(fā)生情況的調查也發(fā)現(xiàn)，生產上大蒜病毒病發(fā)病率為100%，且普遍受到兩種及以上病毒復合侵染，表現(xiàn)的病毒病癥狀包括花葉、植株矮縮、畸形等。

利用組織培養(yǎng)技術脫除病毒是恢復大蒜品種種性、提高鱗莖產量和品質的有效手段，國內外已有大量的研究報道和實踐應用。而病毒脫除成功與否，需要通過檢測技術進行驗證。目前常用的植物病毒檢測方法中，PCR方法因其特異性強、靈敏度高、操作簡便等優(yōu)勢，成為當前植物病毒檢測的首選方法。

已報道的侵染我國大蒜的病毒可劃分為3個屬，包括香石竹潛隱病毒屬（蔥潛隱病毒SLV和大蒜普通潛隱病毒GCLV）、馬鈴薯Y病毒屬（韭蔥黃條病毒LYSV和洋蔥黃矮病毒OYDV）和青蔥X病毒病毒屬（GarVA、GarVB、GarVC、GarVD、GarVE、GarVX、GarMBFV和ShVX）。胡新喜等曾公布了一種四重RT-PCR檢測大蒜病毒的方法，該方法利用四組引物可以同時檢測蔥潛隱病毒（SLV）、韭蔥黃條病毒（LYSV）、洋蔥黃矮病毒（OYDV）和青蔥X病毒屬（Allexivirus）病毒；S. Majumder和V.K. Baranwal也公開發(fā)表了一種能夠同時檢測和鑒定SLV、GCLV、OYDV和Allexiviruses的多重RT-PCR方法。同時利用上述兩種方法對徐州地區(qū)大蒜病毒病進行檢測，發(fā)現(xiàn)SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexivirus均有檢出。然而，現(xiàn)有文獻中報道的引物在同一體系中擴增時，或者有雜帶影響，或者有的目的條帶間間隔太小，容易引起誤判。因此，為了提高大蒜病毒檢測效率、降低檢測成本，需要建立一種能夠同時檢測上述大蒜病毒的多重PCR方法。

發(fā)明內容

針對現(xiàn)有技術中的問題，本發(fā)明提供一種檢測多種大蒜病毒的試劑盒，各條帶分布合理，易于分辨，可同時檢測蔥潛隱病毒SLV、大蒜普通潛隱病毒GCLV、韭蔥黃條病毒LYSV、洋蔥黃矮病毒OYDV和青蔥X病毒屬病毒等12種病毒。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案。

一種大蒜病毒的多重PCR檢測試劑盒，包括SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5組引物對，所述引物對的核苷酸序列如下：

SLV-F：5'-GAGCGAAAGTAGATTCAACAAAC-3'（SEQ ID NO:1），

SLV-R：5'-CCTTATCAGACCCTCAAGTGGT-3'（SEQ ID NO:2）；

GCLV-F：5'-GCTAAGCGGTTTTTGGAGCG-3'（SEQ ID NO:3），