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[發明專利]一種大蒜病毒的多重PCR檢測試劑盒在審

專利信息
申請號: 202111255823.5 申請日: 2021-10-27
公開(公告)號: CN113981142A 公開(公告)日: 2022-01-28
發明(設計)人: 趙永強;劉燦玉;張碧薇;葛潔;楊青青;楊峰;樊繼德;陸信娟;史新敏;李勇 申請(專利權)人: 江蘇徐淮地區徐州農業科學研究所(江蘇徐州甘薯研究中心)
主分類號: C12Q1/70 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94
代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218 代理人: 牛芳
地址: 22100*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 大蒜 病毒 多重 pcr 檢測 試劑盒
【權利要求書】:

1.一種大蒜病毒的多重PCR檢測試劑盒,其特征在于,包括SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5組引物對,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1~10所示;

所述大蒜病毒為蔥潛隱病毒SLV、大蒜普通潛隱病毒GCLV、韭蔥黃條病毒LYSV、洋蔥黃矮病毒OYDV和青蔥X病毒屬Allexivirus病毒中的至少一種。

2. 根據權利要求1所述多重PCR檢測試劑盒,其特征在于,SLV、GCLV、LYSV、OYDV、Allexiviruses引物對的摩爾比為6~72: 6~48: 6: 6: 6~96。

3.根據權利要求1所述多重PCR檢測試劑盒,其特征在于,SLV、GCLV、LYSV、OYDV、Allexiviruses引物對的摩爾比為10:8:3:3:16。

4.根據權利要求1所述多重PCR檢測試劑盒,其特征在于,所述試劑盒還包括陽性對照、陰性對照、緩沖液、PCR酶或水中的一種或幾種的組合。

5.根據權利要求1所述多重PCR檢測試劑盒,其特征在于,所述引物對預混為試劑P。

6.一種檢測大蒜中蔥潛隱病毒SLV、大蒜普通潛隱病毒GCLV、韭蔥黃條病毒LYSV、洋蔥黃矮病毒OYDV和青蔥X病毒屬病毒Allexivirus的方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)按照SEQ ID NO:1~10所示的核苷酸序列合成SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses共5組引物對;

(2)提取待測樣品中的RNA并反轉錄獲得cDNA;

(3)以cDNA為模板,以步驟(1)中的引物對為引物進行PCR反應,獲得PCR產物;

(4)將PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳;

(5)根據電泳條帶進行判斷:出現592 bp條帶含有SLV,出現431 bp條帶含有GCLV,出現338 bp條帶含有LYSV,出現265 bp條帶含有OYDV,出現190 bp條帶含有Allexiviruses

7. 根據權利要求6所述的方法,其特征在于,步驟(3)中,SLV、GCLV、LYSV、OYDV和Allexiviruses引物對的摩爾比為6~72: 6~48: 6: 6: 6~96。

8.根據權利要求6所述的方法,其特征在于,所述PCR反應的退火溫度為54.0-60.0℃。

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