[發(fā)明專利]一種阻斷PD1與PDL1結(jié)合的抗人PDL1納米抗體的制備方法及其編碼序列

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111252166.9
• 申請(qǐng)日: 2021-10-27
• 公開（公告）號(hào): CN116023492A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李江偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆優(yōu)邁生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/28
• 分類號(hào): C07K16/28;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/574;G01N33/68;A61K39/395;A61P35/00;B82Y5/00
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本發(fā)明公開了一種抗人PDL1納米抗體以及其VHH鏈，包括框架區(qū)FR和互補(bǔ)決定區(qū)CDR區(qū)，框架區(qū)選自FR1?FR4的氨基酸序列，CDR區(qū)選自CDR1?CDR3氨基酸序列。同時(shí)還公開了編碼該納米抗體的基因序列和表達(dá)該納米抗體的宿主細(xì)胞。該P(yáng)DL1納米抗體分子量小，特異性強(qiáng)。該納米抗體能在大腸桿菌內(nèi)可溶性表達(dá)蛋白，制備方法簡(jiǎn)單，成本低廉，在對(duì)人PDL1檢測(cè)方面以及在抗腫瘤藥物中具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)或者生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種針對(duì)阻斷PD1與PDL1結(jié)合的抗人PDL1納米抗體的制備方法及其編碼序列。

背景技術(shù)

目前腫瘤的免疫治療方法是腫瘤治療方法中較為有前景的方法之一。免疫治療的主要靶點(diǎn)是針對(duì)免疫檢查點(diǎn)分子。T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷方面都起著重要作用，由于癌細(xì)胞表達(dá)的蛋白質(zhì)突變以及異常加工而產(chǎn)生的新抗原，這些特異性抗原可以被T細(xì)胞表面受體所識(shí)別，從而激發(fā)免疫系統(tǒng)的作用，消除癌細(xì)胞。但是T細(xì)胞表面受體在識(shí)別特異性抗原的過(guò)程有一系列的免疫檢查點(diǎn)分子調(diào)節(jié)。在正常體內(nèi)，免疫檢查點(diǎn)是免疫系統(tǒng)維持自我耐受和阻止自身免疫的抑制途徑。但是癌細(xì)胞能利用免疫檢查點(diǎn)的機(jī)制，通過(guò)靶向作用免疫檢查點(diǎn)，從而逃避?T細(xì)胞調(diào)節(jié)的免疫反應(yīng)。當(dāng)身體受到腫瘤攻擊時(shí)，免疫檢查點(diǎn)被激活，從而抑制自身免疫，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和逃逸。

目前對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑藥物的研發(fā)應(yīng)用在腫瘤的治療領(lǐng)域取得了較好的結(jié)果，免疫檢查點(diǎn)抑制劑的研究引起了越來(lái)越多的關(guān)注。特別是針對(duì)程序性死亡配體1（PDL1，B7-H1，CD274)和程序性死亡受體-1（PD1，CD279）的藥物，對(duì)多種類型腫瘤的治療均有顯著效果。PD-1是在活化T細(xì)胞表面誘導(dǎo)的一種共刺激分子。是CD4⁺和CD8⁺T細(xì)胞表達(dá)的CD28免疫球蛋白家族的成員，與B7家族中的配體（PD-L1和PD-L2）相互作用，PD-L1比PD-L2表達(dá)廣泛，PD-L1?(B7-H1,CD274)在腫瘤細(xì)胞、以及包括樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞和活化T細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞（APCs）上均表達(dá)，因此，PDL1常被用作抗癌藥物設(shè)計(jì)的靶點(diǎn)。在正常細(xì)胞中，PD-1與其配體的結(jié)合限制了T細(xì)胞的活性，從而防止過(guò)度刺激和維持對(duì)自身抗原的免疫耐受。但是腫瘤細(xì)胞通過(guò)上調(diào)表達(dá)PDL1蛋白，PD-1/PD-L1相互作用，減弱內(nèi)源性抗腫瘤免疫反應(yīng)，抑制T淋巴細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子釋放和細(xì)胞毒性，導(dǎo)致腫瘤特異性T細(xì)胞的耗竭和凋亡。因此，阻斷PD-1/PD-L1相互作，能增強(qiáng)T細(xì)胞活性，從而達(dá)到腫瘤免疫治療的效果。用阻斷PD-1/PDL1通路的抗體進(jìn)行免疫治療，已顯示出令人印象深刻的臨床結(jié)果：腫瘤持續(xù)消退，患者生存率提高。目前FDA通過(guò)的靶向PD1的單克隆抗體有Nivolumab和Pembrolizumab，靶向PDL1的單克隆抗體有Atezolizumab、avelumab、durvalumab。

目前針對(duì)PDL1的抗體大多數(shù)為單克隆抗體，但是傳統(tǒng)的單克隆抗體的制備過(guò)程較復(fù)雜，生產(chǎn)成本較高。除此之外，單克隆抗體的分子量較大，存在組織穿透能力較差的問(wèn)題，不能在腫瘤組織處發(fā)揮最大的治療效果。納米抗體，是目前最小的可以結(jié)合抗原的功能性片段，只有單克隆抗體大小的1/10。由于其不同于單抗的獨(dú)特結(jié)構(gòu)，所以不會(huì)造成紅細(xì)胞和血小板發(fā)生凝聚，則在治療過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生出血和血小板減少等副作用。除此之外，納米抗體還具有可溶性好，穩(wěn)定性較高，在原核表達(dá)體系中也能表達(dá)，這就克服了傳統(tǒng)抗體制備周期長(zhǎng)，制造成本較高的問(wèn)題，是一種非常有應(yīng)用前景的新型抗體分子。

目前針對(duì)PDL1靶點(diǎn)的納米抗體還未有臨床應(yīng)用，所以本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的有效針對(duì)PDL1靶點(diǎn)的特異性納米抗體。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種可以阻斷PD1與其配體PDL1結(jié)合的抗PDL1納米抗體，同時(shí)提供該納米抗體的編碼序列及納米抗體的制備方法。