[發明專利]一種阻斷PD1與PDL1結合的抗人PDL1納米抗體的制備方法及其編碼序列

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• 申請號: 202111252166.9
• 申請日: 2021-10-27
• 公開（公告）號: CN116023492A
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 李江偉
• 申請（專利權）人: 新疆優邁生物技術有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/574;G01N33/68;A61K39/395;A61P35/00;B82Y5/00
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1.一種人PDL1納米抗體的VHH鏈，包括框架區FR區和抗原互補決定區CDR區，其特征在于，所述框架區FR區來自其FR1-FR4的氨基酸序列：

SEQ?ID?No?.1所示的FR1，SEQ?ID?No?.2?所示的FR2，SEQ?ID?No?.3?所示的FR3?，?SEQID?No?.4?所示的FR4；

或SEQ?ID?No?.5所示的FR1，SEQ?ID?No?.6?所示的FR2，SEQ?ID?No?.7?所示的FR3?，SEQ?ID?No?.8?所示的FR4；

或SEQ?ID?No?.9所示的FR1，SEQ?ID?No?.10所示的FR2?，SEQ?ID?No?.11所示的FR3?，SEQ?ID?No?.12?所示的FR4；

或SEQ?ID?No?.13所示的FR1，SEQ?ID?No?.14所示的FR2，SEQ?ID?No?.15?所示的FR3，SEQ?ID?No?.16?所示的FR4；

或SEQ?ID?No?.17所示的FR1，SEQ?ID?No?.18?所示的FR2，SEQ?ID?No?.19?所示的FR3，SEQ?ID?No?.20?所示的FR4；

所述的抗原互補決定區CDR區選自以下的CDR1-CDR3氨基酸序列：

SEQ?ID?No?.21所示的CDR1，SEQ?ID?No?.22所示的CDR2，SEQ?ID?No?.23所示的CDR3;

或SEQ?ID?No?.24所示的CDR1，SEQ?ID?No?.25所示的CDR2，SEQ?ID?No?.26所示的CDR3;

或?SEQ?ID?No?.27所示的CDR1，SEQ?ID?No?.28所示的CDR2，SEQ?ID?No?.29所示的CDR3;

或SEQ?ID?No?.30所示的CDR1，SEQ?ID?No?.31所示的CDR2，SEQ?ID?No?.32所示的CDR3;

或SEQ?ID?No?.33所示的CDR1，SEQ?ID?No?34所示的CDR2，SEQ?ID?No?.35所示的CDR3;

根據以上所述的人PDL1納米抗體VHH鏈，其特征在于，它具有SEQ?ID?No?.36，SEQ?IDNo?.37，SEQ?ID?No?.38，SEQ?ID?No?.39，SEQ?ID?No?.40所示的氨基酸序列。

2.一種人PDL1納米抗體，其特征在于，它是針對人PDL1分子表位的納米抗體，包括具有SEQ?ID?No?.36，SEQ?ID?No?.37，SEQ?ID?No?.38，SEQ?ID?No?.39，SEQ?ID?No?.40所示的氨基酸序列的VHH鏈。

3.一種DNA分子，其特征在于，它編碼選自下組的蛋白質：權利要求1或2所示的人PDL1納米抗體的VHH鏈，或權利要求2所示的人PDL1納米抗體。

4.根據權利要求3所述的DNA分子，其特征在于，它具有選自以下組的DNA序列：SEQ?IDNo?.41，SEQ?ID?No?.42，SEQ?ID?No?.43，SEQ?ID?No?.44，SEQ?ID?No?.45。

5.一種表達載體，其特征在于，它含SEQ?ID?No?.41，SEQ?ID?No?.42，SEQ?ID?No?.43，SEQ?ID?No?.44，SEQ?ID?No?.45所示的核苷酸序列。

6.一種宿主細胞，其特征在于，它表達針對人PDL1的納米抗體。

7.一種制備抗PDL1納米抗體的方法，其包括以下步驟：

（1）人PDL1真核蛋白免疫新疆雙峰駝，分離外周血淋巴細胞，構建噬菌體展示文庫；

（2）利用親和篩選的方法，通過真核人PDL1蛋白篩選噬菌體展示文庫；

（3）PE-ELISA的方法挑選結合PDL1陽性克隆并測序分析；

（4）PDL1重組納米抗體的表達與純化；

（5）抗PDL1納米抗體的功能鑒定；

權利要求1-5所述的抗人PDL1納米抗體的用途，其用于制備檢測PDL1的診斷試劑盒，或在癌癥治療藥物中的應用。