[發明專利]一種動物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測方法

在審

• 申請號: 202111243669.X
• 申請日: 2021-10-25
• 公開（公告）號: CN113960205A
• 公開（公告）日: 2022-01-21
• 發明（設計）人: 張亞鋒;梁紅月;王蓓蓓;衛星華;李欣雨;李卓;郭端;賀立
• 申請（專利權）人: 西安市食品藥品檢驗所（西安市藥品不良反應監測中心）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 崔方方

本發明一種動物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測方法，在體液中加入同位素內標中間液，用二氯甲烷提取，分離出二氯甲烷層，剩余部分提取合并得到上清液，移取上清液吹近干，溶解、渦旋振蕩、超聲過濾；將待測液和混合標準工作液用高效液相色譜串聯質譜儀測定，得到譜圖信息；結合混合標準工作液中待測組分含量與峰面積、內標物峰面積與濃度，及待測液中內標物濃度與峰面積、待測組分峰面積、體液體積、二氯甲烷的體積、移取的上清液體積、稀釋倍數，求出去氫表雄酮含量；結合混合標準工作液中待測組分含量和峰面積、待測液中待測組分峰面積、體液體積、二氯甲烷的體積、移取的上清液體積、稀釋倍數，求出其余興奮劑的含量。

技術領域

本發明涉及興奮劑檢測技術領域，具體為一種動物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測方法。

背景技術

動物在食用含興奮劑的飼料后，會造成肌肉及組織中不同程度的殘留，繼而通過生物鏈在人體內殘留，將導致食用者出現不同程度的中毒現象，而運動員也屬于其中的食用者。為維護競技體育的公平和純潔，保證運動員的身體健康，興奮劑檢測已成為所有體育比賽中不可或缺的重要環節。

動物體液中常見的7種蛋白同化制劑類興奮劑，即去氫表雄酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮，需要對它們進行檢測。

為檢測上述興奮劑，技術人員先后嘗試過高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、氣相色譜-質譜聯用(GC/MSD)等方法，但檢測過程中需要對這些興奮劑進行衍生化，同時也會產生操作復雜、檢測周期長、靈敏度較差等問題，導致目前不能對動物體液中的7種蛋白同化制劑類興奮劑進行同時檢測。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明提供一種動物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測方法，可同時檢測出動物體液中是否含有7種蛋白同化制劑類興奮劑。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種動物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測方法，所述的興奮劑為去氫表雄酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮，包括如下步驟：

步驟1，在待測體液中加入去氫表雄酮-D₅同位素內標中間液，之后用二氯甲烷提取，從得到的提取液中分離出二氯甲烷層，將提取液的剩余部分用相同的方式進行提取，并與二氯甲烷層合并得到上清液，然后將移取的上清液吹近干，用乙腈的水溶液溶解，最后渦旋振蕩、超聲過濾，得到待測液；

步驟2，將待測液用高效液相色譜串聯含有電噴霧離子源的質譜儀進行測定，得到相應的譜圖信息；

由所述的7種蛋白同化制劑類興奮劑標準物質中間液用空白基質溶液配制的混合標準工作液，用與待測液相同的條件進行測定，得到相應的譜圖信息；

步驟3，將步驟2形成的兩組譜圖信息進行比對，待測液中興奮劑的保留時間與混合標準工作液中對應興奮劑的保留時間偏差在±5％以內，且不超過0.5min，待測液中興奮劑的定性離子對的相對離子豐度與混合標準工作液中對應興奮劑的相對離子豐度一致，且每個離子的信噪比≥3，得到所述待測液和混合標準工作液中所有興奮劑的色譜峰峰面積，以及混合標準工作液和所述待測液中對應的內標物的峰面積；

步驟4，結合混合標準工作液中待測組分的含量與峰面積、內標物的峰面積與濃度，以及待測液中內標物的濃度與峰面積、待測液中待測組分的峰面積、待測體液體積、二氯甲烷的總體積、移取的上清液體積、乙腈的水溶液體積、稀釋倍數，采用內標法，求出去氫表雄酮的含量；

結合混合標準工作液中待測組分的含量和峰面積、待測液中待測組分的峰面積、待測體液體積、二氯甲烷的總體積、移取的上清液體積、乙腈的水溶液體積、稀釋倍數，采用基質外標法，求出除去氫表雄酮以外所有興奮劑的含量。