[發(fā)明專利]一種動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111243669.X
• 申請(qǐng)日: 2021-10-25
• 公開（公告）號(hào): CN113960205A
• 公開（公告）日: 2022-01-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張亞鋒;梁紅月;王蓓蓓;衛(wèi)星華;李欣雨;李卓;郭端;賀立
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安市食品藥品檢驗(yàn)所（西安市藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心）
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 崔方方

1.一種動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的興奮劑為去氫表雄酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮，包括如下步驟：

步驟1，在待測(cè)體液中加入去氫表雄酮-D₅內(nèi)標(biāo)中間液，之后用二氯甲烷提取，從得到的提取液中分離出二氯甲烷層，將提取液的剩余部分用相同的方式進(jìn)行提取，并與二氯甲烷層合并得到上清液，然后將移取的上清液吹近干，用乙腈的水溶液溶解，最后渦旋振蕩、超聲過濾，得到待測(cè)液；

步驟2，將待測(cè)液用高效液相色譜串聯(lián)含有電噴霧離子源的質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的譜圖信息；

由所述的7種蛋白同化制劑類興奮劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中間液用空白基質(zhì)溶液配制的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，用與待測(cè)液相同的條件進(jìn)行測(cè)定，得到相應(yīng)的譜圖信息；

步驟3，將步驟2形成的兩組譜圖信息進(jìn)行比對(duì)，待測(cè)液中興奮劑的保留時(shí)間與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中對(duì)應(yīng)興奮劑的保留時(shí)間偏差在±5％以內(nèi)，且不超過±0.5min，待測(cè)液中興奮劑的定性離子對(duì)的相對(duì)離子豐度與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中對(duì)應(yīng)興奮劑的相對(duì)離子豐度一致，且每個(gè)離子的信噪比≥3，得到所述待測(cè)液和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中所有興奮劑的色譜峰峰面積，以及混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和所述待測(cè)液中對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)物的峰面積；

步驟4，結(jié)合混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中待測(cè)組分的含量與峰面積、內(nèi)標(biāo)物的峰面積與濃度，以及待測(cè)液中內(nèi)標(biāo)物的濃度與峰面積、待測(cè)液中待測(cè)組分的峰面積、待測(cè)體液體積、二氯甲烷的總體積、移取的上清液體積、乙腈的水溶液體積、稀釋倍數(shù)，采用內(nèi)標(biāo)法，求出去氫表雄酮的含量；

結(jié)合混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中待測(cè)組分的含量和峰面積、待測(cè)液中待測(cè)組分的峰面積、待測(cè)體液體積、二氯甲烷的總體積、移取的上清液體積、乙腈的水溶液體積、稀釋倍數(shù)，采用基質(zhì)外標(biāo)法，求出除去氫表雄酮以外所有興奮劑的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1在分離二氯甲烷層時(shí)，待測(cè)體液、所述的同位素內(nèi)標(biāo)中間液和二氯甲烷的體積比為(4.8～5.2)：0.1：20。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1在待測(cè)體液中加入所述的同位素內(nèi)標(biāo)中間液渦旋混勻后，再加入二氯甲烷渦旋振蕩，最后將所得的混合體系依次超聲、離心，得到二氯甲烷層。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的混合體系先超聲8～15min，再7000～9000r/min離心4～8min，得到二氯甲烷層。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟2中的高效液相色譜采用C18色譜柱，流動(dòng)相A為甲酸的水溶液，甲酸的體積占整個(gè)溶液體積的0.1％，流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫程序如下：

0～2min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積比例保持75％；2～5min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積比例由75％線性減小至30％；5～7min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積比例保持30％；7～7.1min內(nèi)，流動(dòng)相A的體積比例由30％線性減小至10％；7.1～9min內(nèi)，流動(dòng)相A的比例保持10％，9～9.1min內(nèi)，流動(dòng)相A的比例由10％線性增加至75％，9.1～13min內(nèi)，流動(dòng)相A的比例保持75％。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟2所述的質(zhì)譜儀采用如下參數(shù)進(jìn)行工作：

掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，毛細(xì)管電壓為3.5kv，鞘氣溫度為400℃，干燥器溫度為300℃，鞘氣流量為11L/min，干燥器流量為7L/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟1將移取的上清液在35～50℃下用氮?dú)獯到伞?/p>

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)動(dòng)物體液中7種蛋白同化制劑類興奮劑的方法，其特征在于，步驟2和步驟3中所述的譜圖信息為色譜峰、定性離子對(duì)和每個(gè)離子的信噪比。