[發明專利]一種視網膜前體細胞的篩選和培養方法在審
| 申請號： | 202111232182.1 | 申請日： | 2021-10-22 |
| 公開（公告）號： | CN113943707A | 公開（公告）日： | 2022-01-18 |
| 發明（設計）人： | 曾玉曉;鄒婷;徐海偉;段平 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第一附屬醫院 |
| 主分類號： | C12N5/0797 | 分類號： | C12N5/0797 |
| 代理公司： | 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275 | 代理人： | 趙榮之 |
| 地址： | 400038 重*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 視網膜 體細胞 篩選 培養 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種視網膜前體細胞的篩選和培養方法，其特征在于，所述方法為：
(1)取視網膜類器官并分離視網膜神經層，將視網膜神經層放入改良消化液中37℃消化30分鐘，在消化15分鐘后將未消化散的神經層更換另一管新鮮改良消化液，搖晃、輕輕吹打，貼壁培養2天；
(2)取出步驟(1)中貼壁培養細胞，只加入TrypLE消化酶3-5分鐘，收集細胞；
(3)將步驟(2)中收集的細胞用改良N2B27神經干細胞培養基培養。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述改良消化液為TrypLE消化酶中含有0.125％胰蛋白酶。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述改良N2B27神經干細胞培養基包括D/F12D/F12基礎培養基、Neurobasal培養基、B27添加劑、N2添加劑、BFGF和血清替代物。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述D/F12D/F12基礎培養基和Neurobasal培養基的體積比為1：1。
5.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述B27添加劑的質量分數為2％、N2添加劑的質量分數為1％。
6.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述改良N2B27神經干細胞培養基中BFGF的終濃度為20ng/mL。
7.如權利要求3所述的方法，其特征在于，血清替代物的質量分數為3％。
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