[發(fā)明專利]一種促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑及其分離方法與應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111222820.1
• 申請(qǐng)日: 2021-10-20
• 公開（公告）號(hào): CN113980841A
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹杰;馬杰;夏嗣廷;譚軍;黃興國(guó);李鐵軍;印遇龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/02;A01K67/02;C12R1/225
• 代理公司: 北京國(guó)坤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11491
• 代理人: 張國(guó)棟

本發(fā)明屬于微生物菌劑技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑及其分離方法與應(yīng)用，促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑為寧鄉(xiāng)豬糞便分離的約氏乳桿菌(保藏號(hào)：CCTCC M 20211241)；促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑的驗(yàn)證方法包括：選取體重為36.5g、健康狀況相似的ICR雄鼠分為3個(gè)組：對(duì)照組，高脂組和高脂+約氏乳桿菌灌胃組，每組10只小鼠；約氏乳桿菌灌胃組為每日上午9：00進(jìn)行，灌胃量為0.3ml/只，菌液濃度為1×10^9CFU/ml；鼠房采用12h光照和12h黑暗循環(huán)的管理方法，溫度和濕度適宜，自由飲水和采食。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的寧鄉(xiāng)豬糞便來源約氏乳桿菌可以促進(jìn)脂肪在機(jī)體的沉積。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物菌劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑及其分離方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前，我國(guó)是豬肉生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，生豬養(yǎng)殖在國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展中具有重要基礎(chǔ)戰(zhàn)略地位。隨著改革開放40年的發(fā)展，人們生活水平的提高，市場(chǎng)對(duì)豬肉需求量不斷增長(zhǎng)，對(duì)豬肉的品質(zhì)也提出了更高的要求。而肌內(nèi)脂肪是影響肉質(zhì)和口感的重要影響因素。近年來，商品豬大多追求屠宰性能和瘦肉率，瘦肉率高達(dá)60％以上，肌內(nèi)脂肪含量卻小于2.5％，極大影響了豬肉品質(zhì)和口感。另外，腸道微生物在脂質(zhì)代謝中的作用越來越受到關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)腸道微生物參與豬肉質(zhì)和脂質(zhì)代謝，同時(shí)可作為潛在的靶點(diǎn)用于調(diào)控豬脂質(zhì)代謝及肉品質(zhì)。但現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑尚未見報(bào)道。因此，亟需一種新的促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)空白。

通過上述分析，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題及缺陷為：目前，關(guān)于研究促進(jìn)動(dòng)物機(jī)體肪沉積的研究較少，且現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑尚未見報(bào)道。

解決以上問題及缺陷的難度為：該菌劑利用16S rDNA測(cè)序技術(shù)從寧鄉(xiāng)豬腸道中篩選，并與血清脂質(zhì)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，篩選差異菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)在于16S rDNA測(cè)序技術(shù)的掌握與數(shù)據(jù)分析，Pearson關(guān)聯(lián)分析等技術(shù)。

解決以上問題及缺陷的意義為：該菌劑可提高機(jī)體的脂肪含量以及血清中脂質(zhì)的含量。該結(jié)果可應(yīng)用于瘦肉型豬的養(yǎng)殖，可促進(jìn)瘦肉型豬脂肪的沉積，改善肉質(zhì)和口感。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑及其分離方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑，所述促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑為寧鄉(xiāng)豬糞便分離的約氏乳桿菌，保藏單位：武漢大學(xué)菌種保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2021年9月29日，保藏號(hào)：CCTCC M 20211241。使用劑量為1×10⁹CFU/ml。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述的促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑的分離方法。取健康寧鄉(xiāng)豬糞便0.1g，用5mL無菌PBS溶解、振蕩混勻，梯度稀釋至10^-7，吸取100μL梯度在10^-2～10^-7的稀釋液涂布于添加0.5％L-半胱氨酸MRS平板中，置于5％二氧化碳、37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h。選擇稀釋梯度合適的平板，挑取不同形態(tài)的單菌落，并利用擴(kuò)增細(xì)菌16SrDNA基因通用引物為27-FAGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492R-GGTTACCTTGTTACGACTT進(jìn)行菌落PCR鑒定。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種所述的促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑在制備促進(jìn)脂肪沉積組合物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種驗(yàn)證所述的促進(jìn)脂肪沉積的微生物菌劑藥效的動(dòng)物模型構(gòu)建方法，所述動(dòng)物模型構(gòu)建方法包括：

(1)選取體重相近，健康狀況相似的ICR雄鼠30只，分為3個(gè)組：對(duì)照組，高脂組和高脂+約氏乳桿菌灌胃組，每組10只小鼠；

(2)約氏乳桿菌灌胃組為每日上午9：00進(jìn)行，灌胃量為0.3ml/只，菌液濃度為1×10^9CFU/ml；