[發(fā)明專利]基于LAMP快速檢測(cè)有毒蘑菇日本紅菇的引物組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111222747.8
• 申請(qǐng)日: 2021-10-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113943828B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳作紅;龍攀;何正蜜;張平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 長(zhǎng)沙朕揚(yáng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43213
• 代理人: 郭蓓霏;楊斌

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于LAMP快速檢測(cè)有毒蘑菇日本紅菇的引物組合物、試劑盒及方法，其中引物組合物包括：正向內(nèi)引物FIP、反向內(nèi)引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和環(huán)引物L(fēng)B。該LAMP引物組合物、試劑盒及方法，具有很強(qiáng)的特異性，能夠快速、準(zhǔn)確、靈敏、方便地檢測(cè)樣品是否為有毒的日本紅菇，與老百姓平時(shí)采食的美味紅菇易于區(qū)分，可以滿足基層疾控和醫(yī)療單位對(duì)蘑菇中毒后快速鑒定毒源的要求，對(duì)病人進(jìn)行有效救治，避免醫(yī)療資源的過(guò)度浪費(fèi)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于有毒生物的快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)技術(shù)快速檢測(cè)有毒紅菇日本紅菇的引物組合物、試劑盒及方法。

背景技術(shù)

日本紅菇(Russula?japonica)在分類上隸屬于擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、蘑菇綱(Agaricomycetes)、紅菇目(Russulales)、紅菇科(Russulaceae)、紅菇屬(Russula)。日本紅菇為該屬最易被老百姓誤食的物種，與老百姓平時(shí)采食的美味紅菇極為相近，無(wú)法通過(guò)生活經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行鑒別區(qū)分。據(jù)2019年及2020年中國(guó)疾病防控與預(yù)防中心蘑菇中毒年度調(diào)查報(bào)告顯示，根據(jù)中毒案例鑒定出56種導(dǎo)致胃腸炎癥狀的物種，日本紅菇導(dǎo)致的中毒案例分布廣泛，發(fā)病率高，共導(dǎo)致289人中毒，且中毒案例數(shù)連年高居第二。

LAMP是日本科學(xué)家Notomi發(fā)明的一種具高特異性、高效性的核酸擴(kuò)增技術(shù)。對(duì)靶基因的6個(gè)特異部位設(shè)計(jì)2對(duì)特殊引物(1對(duì)內(nèi)引物FIP和BIP，1對(duì)外引物F3和B3)利用具有鏈置換活性的Bst?DNA聚合酶于等溫條件下(60-65℃)反應(yīng)30min～60min催化新鏈合成，實(shí)現(xiàn)靶DNA?10⁹-10¹⁰倍的擴(kuò)增。反應(yīng)操作簡(jiǎn)單耗時(shí)短，無(wú)需昂貴復(fù)雜的儀器，適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

然而，目前國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有關(guān)于有毒紅菇日本紅菇快速檢測(cè)的報(bào)道與專利。因此，開(kāi)發(fā)一種基于LAMP快速檢測(cè)有毒蘑菇日本紅菇的引物組合物、試劑盒及方法，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，克服以上背景技術(shù)中提到的不足和缺陷，提供一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)技術(shù)、快速檢測(cè)有毒紅菇日本紅菇的引物組合物、試劑盒及方法，適用于現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了日本紅菇的可視化快速檢測(cè)。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案為：

一種基于LAMP快速檢測(cè)有毒蘑菇日本紅菇的引物組合物，包括：正向內(nèi)引物FIP、反向內(nèi)引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和環(huán)引物L(fēng)B；堿基序列如下：

FIP：5’-AGCTGGCTTTGAGAGGAAAGCTAATGGTTTCTTGATCAAGAAGGC-3’(由SEQ?ID?NO:1所示)；

BIP：5’-TAGTAGGGTCTACTTTGCTGATCCTATAGGTTTGCAAAAGCCCAAG-3’(由SEQ?ID?NO:2所示)；

F3：5’-TGTCGTGATATCTTCAACCTT-3’(由SEQ?ID?NO:3所示)；

B3：5’-AGTCTCTGACGAGACAGTT-3’(由SEQ?ID?NO:4所示)；

LB：5’-AGCAAAAGCCTCCAAATTCCAA-3’(由SEQ?ID?NO:5所示)。

基于一個(gè)總的發(fā)明構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種基于LAMP快速檢測(cè)有毒蘑菇日本紅菇的試劑盒，包含上述的引物組合物。

上述的試劑盒，進(jìn)一步的，包含：10μM正向內(nèi)引物FIP、10μM反向內(nèi)引物BIP、10μM正向外引物F3、10μM反向外引物B3和10μM環(huán)引物L(fēng)B。