[發明專利]基于LAMP快速檢測有毒蘑菇日本紅菇的引物組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202111222747.8
• 申請日: 2021-10-20
• 公開（公告）號: CN113943828B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 陳作紅;龍攀;何正蜜;張平
• 申請（專利權）人: 湖南師范大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 郭蓓霏;楊斌

1.一種基于LAMP快速檢測有毒蘑菇日本紅菇的方法，其特征在于，包括如下步驟：提取待測樣品的基因組DNA，以提取的基因組DNA為DNA模板，進行LAMP反應；

所述LAMP反應的體系為10μL，包括：1μL?pH＝8.8的10×ThermoPol?buffer、0.4μL濃度為100mM的MgSO4、1.4μL濃度為10mM?each的dNTP?Mix、0.4μL濃度為8000U/mL的Bst?DNAPolymerase、0.6μL濃度為8000U/mL的HNB、1μL濃度為1-10ng/μL的DNA模板、LAMP引物，雙蒸水定容；

其中LAMP引物包括：0.12μL濃度為10μM的正向內引物FIP、0.12μL濃度為10μM的10μM反向內引物BIP、1.28μL濃度為10μM的10μM正向外引物F3、1.28μL濃度為10μM的反向外引物B3和0.64μL濃度為10μM的環引物LB；堿基序列如下：

FIP：5’-AGCTGGCTTTGAGAGGAAAGCTAATGGTTTCTTGATCAAGAAGGC-3’；

BIP：5’-TAGTAGGGTCTACTTTGCTGATCCTATAGGTTTGCAAAAGCCCAAG-3’；

F3：5’-TGTCGTGATATCTTCAACCTT-3’；

B3：5’-AGTCTCTGACGAGACAGTT-3’；

LB：5’-AGCAAAAGCCTCCAAATTCCAA-3’；

所述LAMP反應的程序為：將反應試劑添加完成后加入石蠟油進行封層，離心混勻后60-65℃水浴或金屬浴30min～60min，然后在80℃以上孵育至少10min；

終止LAMP反應后，根據反應液顏色變化判斷檢測結果，若反應液呈藍色，則表示檢測結果為陽性；若反應液呈紫色，則表示檢測結果為陰性；

終止LAMP反應后，根據凝膠電泳平行實驗是否檢出階梯型條帶判斷檢測結果，若檢測到階梯型條帶，則表示檢測結果為陽性；若未檢測到階梯型條帶，則表示檢測結果為陰性。