[發(fā)明專利]黏膜適用的類無針注射效果的外泌體制劑及制備方法

有效

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• 申請日: 2021-10-19
• 公開（公告）號: CN113730361B
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發(fā)明（設計）人: 王哲;明磊國;王清霞;董玲娟;姜勃;白天君
• 申請（專利權）人: 陜西科美致尚生物科技有限公司
• 主分類號: A61K9/19
• 分類號: A61K9/19;A61K35/28;A61K47/10;A61K47/26;A61P15/02;A61P31/02;C12N1/20;C12N5/0775;C12N11/10;A61K9/127;A61K9/14;A61K38/19;A61K45/06;A61K31/722
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種黏膜適用的類無針注射效果的外泌體制劑及制備方法。本發(fā)明將間充質干細胞與乳酸菌共培養(yǎng)，收集上清，通過超濾濃縮技術根據分子量依次分離間充質干細胞分泌的細胞因子和外泌體，其中細胞因子經脂質體包封，覆被S層蛋白，然后與外泌體按比例混合，制成凍干粉，進而制備成干粉噴霧劑，該干粉噴霧劑具有類似無針注射的透皮吸收效果，通過陰道黏膜給藥，不易流失，可以極大的降低損耗。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種黏膜適用的類無針注射效果的外泌體制劑及制備方法。

背景技術

隨著生物大分子藥物的發(fā)展，如何安全有效的進行藥物遞送逐漸成為研究熱點。口服途徑攝入生物大分子，會經消化道分解失效；有針注射則會引發(fā)顯著組織損傷，且痛感明顯，患者順應性低，不利于藥物的日常使用。因此，生物大分子無針注射技術得到廣泛關注，該技術在進行藥物遞送時不借助針頭，利用機械裝置產生的瞬間高壓將藥物以液體針的形式瞬間穿過患者的表皮細胞，使藥物像水花一樣均勻分布在皮下，注射時無明顯刺痛，且吸收面積增加。

從不借助針頭、使藥物均勻分布在皮下這些方面來說，廣義的無針注射理應包含透皮給藥途徑。透皮給藥使用方便，用藥次數(shù)少，避免胃腸道刺激和肝首過效應，且藥物毒副作用低。但是，由于黏膜等屏障的存在，生物大分子類藥物成分很難直接通過，所以想達到無針注射效果，其關鍵在于尋找合適的方法來提高藥物的透過量。

陰道是由黏膜、肌層和外膜組成的肌性管道，表面存在許多褶皺，提供擴張性，支撐和增加陰道壁的表面積。陰道壁上血管豐富，血流通過會陰靜脈叢流向會陰靜脈，最終進入下腔靜脈，密集的血管網絡使陰道能夠成為藥物傳輸?shù)挠行緩健ｊ幍鲤つそo藥起效迅速，不僅可直達病灶部位，發(fā)揮局部治療效果，在陰道炎、宮頸炎等疾病的治療和避孕等方面具有顯著優(yōu)勢，還可避免肝臟首過效應，發(fā)揮全身治療作用。但陰道內環(huán)境在正常情況下存在多種細菌以一定的比例生長，比如主要菌種之一的乳酸菌，負責維持陰道的酸性環(huán)境，保持pH處于4-4.5，防止致病菌在陰道內繁殖；且陰道可分泌黏液自我清潔，黏液的分泌會導致藥物流失，減少藥物與陰道黏膜的接觸時間，降低預期療效。加上陰道黏膜具有屏障作用，降低了藥物的滲透率。因此，增加藥物制劑的黏附性、提高藥物制劑的滲透效果是陰道黏膜給藥制劑研究的重點與難點。

發(fā)明內容

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種黏膜適用的類無針注射效果的外泌體制劑及制備方法。

本發(fā)明的目的是提供一種黏膜適用的類無針注射效果的外泌體制劑的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，干細胞與乳酸菌共培養(yǎng)

以海藻酸鈉溶液、CaCl₂溶液和乳酸菌為原料，制備乳酸菌-海藻酸鈉凝膠球；

將間充質干細胞以4-7×10⁴個/mL的密度接種于培養(yǎng)容器中，然后置于37℃，5％CO₂，飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1d；

將乳酸菌-海藻酸鈉凝膠球以10-30個/mL的比例加入上述含間充質干細胞的培養(yǎng)容器中，37℃，5％CO₂，飽和濕度培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)1-3d，分別收集上清液和共培養(yǎng)所得乳酸菌-海藻酸鈉凝膠球；

步驟2，分離外泌體與細胞因子

步驟1收集的上清液離心去除死細胞，再過濾去除細胞碎片及其它較大粒徑的顆粒，最后通過超濾濃縮工藝根據分子量依次分離間充質干細胞分泌的外泌體和細胞因子；

步驟3，制備S層蛋白包被的細胞因子脂質體

將步驟2分離得到的細胞因子復配藥物，所得混合溶液注入攪拌狀態(tài)下的液體磷脂中，然后進行均質處理，得到細胞因子脂質體溶液；