[發明專利]高活性的mTET2酶突變體、其編碼DNA及其應用有效
| 申請號： | 202111208754.2 | 申請日： | 2021-10-18 |
| 公開（公告）號： | CN113846070B | 公開（公告）日： | 2023-05-16 |
| 發明（設計）人： | 侯策;韋磊;江翱;陳晶晶;黃開喻;滕以剛;曹振;宋東亮 | 申請（專利權）人： | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C12N15/54;C12Q1/6886 |
| 代理公司： | 蘇州根號專利代理事務所(普通合伙) 32276 | 代理人： | 朱華慶 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 活性 mtet2 突變體 編碼 dna 及其 應用 | ||
1.一種高活性的mTET2酶突變體mTET2CDT，其特征在于其氨基酸序列如SEQ?ID?No.3所示。
2.權利要求1所述的高活性的mTET2酶突變體mTET2CDT的編碼DNA，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。
3.一種高活性的mTET2酶突變體mTET2CDTm，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ?ID?No.4所示。
4.權利要求3所述的高活性的mTET2酶突變體mTET2CDTm的編碼DNA，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示。
5.權利要求1所述的高活性的mTET2酶突變體mTET2CDT或權利要求3所述的高活性的mTET2酶突變體mTET2CDTm在DNA甲基化檢測中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于其步驟包括：
（1）在待測樣本中加入權利要求1所述的高活性的mTET2酶突變體mTET2CDT或權利要求3所述的高活性的mTET2酶突變體mTET2CDTm進行氧化反應，將樣本中的5mC氧化成5hmC；
（2）終止反應，回收DNA；
（3）DNA甲基化檢測分析。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：步驟（1）中還加入TET酶氧化緩沖液。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述TET酶氧化緩沖液配比為：
其中10×?mTET?buffer的配比為：
。
9.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：步驟（1）中氧化反應的過程為：37℃保溫10-60?min。
10.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：步驟（2）中使用0.1-1?mg/ml的蛋白酶K、0.1-1%的十二烷基硫酸鈉或者1-50?mM的乙二胺四乙酸來終止反應。
11.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：步驟（2）中終止反應的過程為：45-65℃保溫3-30?min。
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