[發(fā)明專利]一種高通量快速檢測水樣急性毒性的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111194910.4 | 申請日： | 2021-10-14 |
| 公開（公告）號： | CN113930478A | 公開（公告）日： | 2022-01-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 何席偉;張徐祥;周嘉偉;侯俊青;余靜 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京大學(xué);南京大學(xué)宜興環(huán)保研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/04 | 分類號： | C12Q1/04;G01N21/76 |
| 代理公司： | 江蘇瑞途律師事務(wù)所 32346 | 代理人： | 陳彬 |
| 地址： | 210033 江蘇省南京市棲霞區(qū)*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 通量 快速 檢測 水樣 急性 毒性 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，屬于環(huán)境檢測分析領(lǐng)域。上述方法以發(fā)光菌為受試生物，檢測步驟包括：樣品處理、發(fā)光菌工作液制備、樣品檢測和毒性表征。本方法通過對水樣的萃取處理，可避免無機鹽離子對有機物毒性的干擾；在檢測過程中，通過對發(fā)光菌的“馴化”，有效提高了其檢測的靈敏度；結(jié)合微板法操作，可實現(xiàn)同時對多個水樣急性毒性的批量檢測。此外，本發(fā)明提供了以氯化汞為參照化合物時的水樣急性毒性等級的評估體系，將本發(fā)明方法測得的TEQ直接用于評估，減少了其他檢測方法的轉(zhuǎn)化過程，具有更廣的適用性，在水樣毒性監(jiān)測趨于常態(tài)化的背景下，本發(fā)明方法具有廣泛推廣性。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于環(huán)境檢測分析領(lǐng)域，具體地，涉及一種高通量快速檢測水樣急性毒性的方法。
背景技術(shù)
隨著廢水水質(zhì)安全排放和回用要求的不斷提高，廢水毒性監(jiān)測越來越受到重視。發(fā)光菌因其對毒性物質(zhì)敏感，且生長快、反應(yīng)時間短等特點，在廢水急性毒性評估中被廣泛使用。
水樣的發(fā)光菌急性毒性取決于水樣中化學(xué)物質(zhì)的類型、濃度及其累積效應(yīng)，但由于廢水中存在的一些金屬離子(例如銅離子)會對發(fā)光菌產(chǎn)生“低促高抑”的作用，使得在使用傳統(tǒng)發(fā)光菌法檢測原水樣生物毒性時，金屬離子會對廢水中有機污染物的毒性效應(yīng)產(chǎn)生一定程度的掩蓋，從而低估廢水的急性毒性。另一方面，傳統(tǒng)發(fā)光菌法利用新復(fù)蘇的發(fā)光菌凍干粉進行毒性檢測，其靈敏度受限，無法準(zhǔn)確反應(yīng)污染程度較低的水樣的急性毒性當(dāng)量。此外，傳統(tǒng)發(fā)光菌法通過2mL或5mL測試管規(guī)格的生物發(fā)光光度計檢測水樣的發(fā)光亮，通量較低，不利于多個水樣的批量處理。
隨著廢水毒性監(jiān)測越來越朝向常規(guī)水質(zhì)監(jiān)測發(fā)展，開發(fā)高通量快速檢測水樣急性毒性的方法具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容
1.要解決的問題
針對傳統(tǒng)發(fā)光菌法在抗離子干擾、靈敏度低和檢測通量低等方面的不足，本發(fā)明提供一種可排除無機物干擾、靈敏度高、快速高通量檢測水樣急性毒性的方法。
2.技術(shù)方案
為了解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：
本發(fā)明提供了一種高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，包括以下步驟：
(a)水樣處理：對水樣進行萃取處理，濃縮水樣中有機物；濃縮水樣中的有機物，有利于減少水樣中無機物，如金屬離子的干擾；
(b)發(fā)光菌工作液制備：將發(fā)光菌接種于發(fā)光菌固體培養(yǎng)基上活化，挑取活化后的發(fā)光菌單菌落接種至發(fā)光菌液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)后的發(fā)光菌菌液稀釋制成發(fā)光菌工作液，工作液的發(fā)光量控制在10000～50000RLU；
(c)樣品檢測：在樣品檢測板中分別加入梯度濃度的參照化合物溶液、陰性對照液和梯度濃縮系數(shù)的樣品，將96孔板至于通風(fēng)櫥中15～20min后迅速在每孔加入已知量發(fā)光菌工作液，室溫靜置15～20min，酶標(biāo)儀檢測每孔發(fā)光量(RLU)；
(d)毒性表征：根據(jù)式(1)計算各梯度濃度參照化合物和梯度濃縮系數(shù)樣品的發(fā)光度抑制率IR，分別擬合參照化合物濃度和樣品濃縮系數(shù)的劑量-效應(yīng)曲線，獲得產(chǎn)生x％抑制率時參照化合物的濃度ECx參照化合物(以濃度表示)和產(chǎn)生x％抑制率時樣品的相對濃縮系數(shù)ECx樣品(以相對濃縮系數(shù)表示)，根據(jù)式(2)計算樣品毒性當(dāng)量(TEQ)，樣品毒性當(dāng)量是將樣品的急性毒性折算成產(chǎn)生同樣急性毒性的參照化合物的濃度：
其中，其中，ECx參照化合物(以濃度表示)為產(chǎn)生x％抑制率時參照化合物的濃度，ECx樣品(以相對濃縮系數(shù)表示)為產(chǎn)生x％抑制率時樣品的相對濃縮系數(shù)。
作為本發(fā)明進一步的改進，上述步驟(a)中水樣的濃縮倍數(shù)不小于20倍，濃縮的樣品溶解于甲醇中。
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