[發(fā)明專利]一種高通量快速檢測水樣急性毒性的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111194910.4
• 申請日: 2021-10-14
• 公開（公告）號: CN113930478A
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何席偉;張徐祥;周嘉偉;侯俊青;余靜
• 申請（專利權(quán)）人: 南京大學(xué);南京大學(xué)宜興環(huán)保研究院
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;G01N21/76
• 代理公司: 江蘇瑞途律師事務(wù)所 32346
• 代理人: 陳彬

1.一種高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(a)水樣處理：濃縮水樣中有機物；濃縮水樣中的有機物，有利于減少水樣中無機物，如金屬離子的干擾；

(b)發(fā)光菌工作液制備：將發(fā)光菌接種于發(fā)光菌固體培養(yǎng)基上活化，挑取活化后的發(fā)光菌單菌落接種至發(fā)光菌液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)后的發(fā)光菌菌液稀釋制成發(fā)光菌工作液，工作液的發(fā)光量控制在10000～50000RLU；

(c)樣品檢測：在樣品檢測板中分別加入梯度濃度的參照化合物溶液、陰性對照液和梯度濃縮系數(shù)的樣品，將96孔板至于通風(fēng)櫥中15～20min后迅速在每孔加入已知量發(fā)光菌工作液，室溫靜置15～20min，酶標(biāo)儀檢測每孔發(fā)光量(RLU)；

(d)毒性表征：根據(jù)式(1)計算各梯度濃度參照化合物和梯度濃縮系數(shù)樣品的發(fā)光度抑制率IR，分別擬合參照化合物濃度和樣品濃縮系數(shù)的劑量-效應(yīng)曲線，獲得產(chǎn)生x％抑制率時參照化合物的濃度和產(chǎn)生x％抑制率時樣品的相對濃縮系數(shù)，根據(jù)式(2)計算樣品毒性當(dāng)量(TEQ)，樣品毒性當(dāng)量是將樣品的急性毒性折算成產(chǎn)生同樣急性毒性的參照化合物的濃度：

其中，EC_x參照化合物(以濃度表示)為產(chǎn)生x％抑制率時參照化合物的濃度，EC_x樣品(以相對濃縮系數(shù)表示)為產(chǎn)生x％抑制率時樣品的相對濃縮系數(shù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述步驟(a)中水樣的濃縮倍數(shù)不小于20倍。

3.根據(jù)權(quán)利要求2中所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述萃取處理包括液-液萃取或固相萃取。

4.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述水樣的液-液萃取方法可采用二氯甲烷或乙酸乙酯提取水樣中有機物。

5.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述固相萃取方法可采用Oasis HLB或C18固相萃取柱萃取水樣，并用甲醇或乙酸乙酯洗脫。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述步驟(b)中培養(yǎng)指活化后的發(fā)光菌單菌落接種至發(fā)光菌液體培養(yǎng)基中20～25℃培養(yǎng)10～15h。

7.根據(jù)權(quán)利要求6中所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述步驟(b)中發(fā)光菌為明亮發(fā)光菌。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7中所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述步驟(c)中的參照化合物為氯化汞，氯化汞溶于甲醇中，其梯度溶液的濃度范圍為0.2～2.4mg/L；陰性對照液為甲醇。

9.根據(jù)權(quán)利要求8中所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述步驟(c)中的參照化合物、陰性對照、樣品的加樣體積均為10μL，樣品的加樣體積不足10μL時用甲醇補足。

10.根據(jù)權(quán)利要求9中所述的高通量快速檢測水樣急性毒性的方法，其特征在于，所述方法還包括水樣急性毒性級別評估體系：

a)TEQ≥0.07mg/L，其毒性等級為高毒；

b)0.007mg/L≤TEQ0.07mg/L，其毒性等級為低毒；

c)TEQ0.007mg/L，其毒性等級為無毒。