[發明專利]厚壁菌門與擬桿菌門的核酸檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202111193305.5
• 申請日: 2021-10-13
• 公開（公告）號: CN113981114A
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發明（設計）人: 方鵬宇;郭紅輝
• 申請（專利權）人: 廣東君道營養科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

本發明公開了一種厚壁菌門與擬桿菌門的核酸檢測試劑盒及檢測方法。本發明以厚壁菌門與擬桿菌門的高度保守區為靶區域，通過設計優化特異性引物和探針，建立了可同時檢測厚壁菌門與擬桿菌門的檢測方法。與傳統的細菌鑒定方法相比，本發明具有特異性強、靈敏度高、操作便捷、檢測快速、準確等優勢，可用于實際樣本腸道菌群的厚壁菌門與擬桿菌門的相對定量檢測，也可用于定量檢測厚壁菌門與擬桿菌門的比值，有助于肥胖炎癥與2型糖尿病的研究，對于通過對腸道菌群的研究來調節腸道菌群促進腸道健康具有重要意義。

技術領域

本發明屬于微生物學檢測領域技術領域。更具體地，涉及厚壁菌門與擬桿菌門的核酸檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

肥胖和糖尿病的發病率呈逐年增高趨勢，但其發病機制尚未闡明。飲食作為重要的環境因素，其代謝與腸道微生物密切相關。越來越多研究表明腸道菌群失調(宿主和腸道微生物群之間的共生關系發生改變)與各種疾病有關，包括炎癥性腸病(IBD)、腸易激綜合征、肥胖、過敏、自身免疫性疾病和腦疾病。因此，許多研究者認為可以通過調節腸道菌群來促進腸道健康。

人體腸道菌群主要有厚壁菌門(Firmicutes)和擬桿菌門(Bacteroidetes)組成，其余多為放線菌門(Actinobacteria)、變形桿菌門(Proteobacteria)和疣微菌門(Verrucomicrobia)。其中，厚壁菌門和擬桿菌門約占人體腸道菌群的90％以上。在正常生理情況下，腸道菌群對機體的代謝及腸道局部微環境起著極其重要的作用。厚壁菌門與擬桿菌門的比值不僅會影響機體的碳水化合物代謝，被認為是與肥胖炎癥過程相關的一個重要因素；而且改變了短鏈脂肪酸的產生，誘發胰島素抵抗，從而影響2型糖尿病(T2DM)。為了更好地研究厚壁菌門與擬桿菌門的比值與肥胖炎癥和T2DM的關聯性，需要更精確地篩選出肥胖易感性的生物標志物、T2DM的菌群標志物，建立一種靈敏、精確、快速的方法用于定量檢測厚壁菌門與擬桿菌門的比值，有助于肥胖炎癥與2型糖尿病的研究。

目前，腸道菌群的檢測方法主要包括傳統培養法和分子生物學法兩大類。傳統培養法是微生物鑒定的基本方法，但其存在耗時長、培養要求高、影響因素多等問題。分子生物學方法為腸道細菌的檢測提供了更多可能，它具有檢測時間短、靈敏度高、結果準確等優勢，彌補了傳統培養法的諸多不足，被廣泛地應用于腸道微生態生物研究。專利CN108486228 A公開了一種預判斷膿毒癥感染情況的熒光定量PCR檢測試劑盒及其方法，提供了四組分別檢測擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和放線菌門的引物組，分別采用熒光定量染料法進行檢測，實現了通過檢測人體腸道菌群門分類水平結構，為膿毒癥的診斷提供可靠的感染證據以及感染的病原學類型。但由于分別檢測四種菌，并不能實現同時檢測。

目前沒有針對厚壁菌門與擬桿菌門同時檢測的方法和相關試劑的有關報道，為了更好地研究厚壁菌門與擬桿菌門的比值與肥胖炎癥和糖尿病的關聯性，需要建立一種靈敏、精確、快速的方法用于同時定量檢測厚壁菌門與擬桿菌門的方法，有助于肥胖炎癥與糖尿病的研究。

發明內容

本發明要解決的技術問題是建立一種同時檢測厚壁菌門與擬桿菌門的試劑盒及檢測方法，為在腸道菌群上的研究對肥胖炎癥與糖尿病提供技術支持。

本發明的第一個目的是提供厚壁菌門與擬桿菌門的檢測引物組。

本發明的第二個目的是提供厚壁菌門與擬桿菌門的檢測引物組的應用。

本發明的第三個目的是提供厚壁菌門與擬桿菌門核酸檢測試劑盒。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

本發明分析了厚壁菌門與擬桿菌門的基因組信息與特性，最終選擇了合適的保守區域，并在這些保守區域中設計出一系列針對檢測厚壁菌門與擬桿菌門的特異性引物。通過大量篩選和優化，最終確定了一組靈敏度和特異性最優的引物和探針組合序列。