[發明專利]一種可誘導B細胞缺陷小鼠模型的構建方法及應用

有效

• 申請號: 202111189601.8
• 申請日: 2021-10-13
• 公開（公告）號: CN113615643B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 孫瑞林;王津津;池駿
• 申請（專利權）人: 廣東南模生物科技有限公司;上海南方模式生物科技股份有限公司;上海砥石生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90;A01K67/027;C12N15/62
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;王永偉

1.一種誘導B細胞缺陷小鼠模型的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）gRNA靶位點篩選：篩選靶位點，合成識別靶位點的gRNA，所述gRNA識別的靶位點序列如SEQ ID NO:3所示；

2）同源重組載體構建：同源重組載體結構從左到右依次為：重組左臂、核糖體接入位點IRES、白喉毒素受體DTR、綠色熒光蛋白、重組右臂；白喉毒素受體DTR與綠色熒光蛋白組成融合蛋白表達框；

3）構建小鼠模型：將步驟2）獲得的同源重組載體和Cas9 mRNA 、gRNA混合，導入小鼠，傳代獲得重組陽性小鼠；所述同源重組載體插入Cd19基因終止密碼子之后；

其中，步驟2）中重組左臂、核糖體接入位點IRES、白喉毒素受體DTR與綠色熒光蛋白的融合蛋白表達框、重組右臂序列依次為SEQ ID NO:11-14。

2.根據權利要求1所述的誘導B細胞缺陷小鼠模型的構建方法，其特征在于，還包括鑒定步驟：抽提步驟3）獲得的重組陽性小鼠基因組，分別利用針對重組左臂的鑒定引物對P1和P2，以及針對重組右臂的鑒定引物對P3和P4，對是否發生正確同源重組進行鑒定，P1-P4分別如SEQ ID NO:15-18所示。

3.根據權利要求1-2中任一項所述誘導B細胞缺陷小鼠模型的構建方法制備的B細胞缺陷小鼠模型在誘導B細胞缺陷中的用途。

4.根據權利要求3所述的用途，其特征在于，給予小鼠白喉毒素造成B細胞缺陷后，B細胞功能能夠恢復。

5.一種白喉毒素調控B細胞缺陷的非疾病診斷治療的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）按照權利要求1-2中任一項所述一種誘導B細胞缺陷小鼠模型的構建方法構建B細胞缺陷的小鼠模型；

2）給予小鼠模型白喉毒素造成B細胞缺陷后，B細胞功能能夠恢復。

6.根據權利要求5所述的一種白喉毒素調控B細胞缺陷的非疾病診斷治療的方法，其特征在于，所述白喉毒素劑量為0.015mg/kg，分3次連續給藥，維持2周時間內的B細胞缺缺陷。