[發明專利]點蜂緣蝽突觸融合蛋白結合蛋白RpSDP及其應用

有效

• 申請號: 202111179160.3
• 申請日: 2021-10-09
• 公開（公告）號: CN114507669B
• 公開（公告）日: 2023-07-11
• 發明（設計）人: 孫宗濤;黃海劍;魏中艷;李俊敏;張傳溪;陳劍平
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C12N15/70;C12N15/113;A01N57/16;A01P7/04;C12N15/89
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種特異性抑制RpSDP基因表達的dsRNA在制備殺蟲劑中的用途，

所述dsRNA的通過以下步驟獲得：

（1）取點蜂緣蝽若蟲，Trizol法提取總RNA，并利用點蜂緣蝽總RNA為模板合成cDNA第一條鏈；

（2）以點蜂緣蝽cDNA為模板，以序列如SEQ?ID?NO.2所示的上游引物和序列如SEQ?IDNO.3所示的下游引物進行PCR擴增，得到含有的基因片段序列如SEQ?ID?NO:4所示的PCR擴增產物；

（3）將上述擴增獲得的基因片段連接克隆載體，轉化到大腸桿菌TG1，在含有氨芐青霉素的LB固體培養基上培養，獲得含有目的基因的單克隆菌落；

（4）將單克隆菌落在含有氨芐青霉素的LB液體培養內擴大培養，抽提含有目的基因的質粒；

（5）以質粒為模板，以序列如SEQ?ID?NO.5所示的上游引物和以序列如SEQ?ID?NO.6所示的下游引物進行PCR擴增，獲得大量的、單一的含有T7啟動子的基因片段；

（6）以步驟（5）所述基因片段為DNA模板合成dsRNA，反應體系為：2?μl?10×ReactionBuffer，2?μl?ATP?solution，2?μl?UTP?solution，2?μl?CTP?solution，2?μl?GTPsolution，2?μl?enzyme?mix，1?μg?DNA模板，并用無RNase水補齊到20?μl，反應體系配好后混勻，37℃反應過夜；

（7）向反應體系加入1?μlTURBO?DNase，37℃反應15?min；

（8）將反應后的樣品在65℃變性5?min；

（9）用Nanodrop測定dsRNA濃度，1%瓊脂糖凝膠電泳確定dsRNA質量。

2.一種點蜂緣蝽防治方法，其特征是，將特異性抑制RpSDP基因表達的dsRNA喂食點蜂緣蝽，所述dsRNA通過權利要求1所述的步驟（1）到（9）獲得。