[發(fā)明專利]一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111178912.4
• 申請日: 2021-10-11
• 公開（公告）號: CN113846018B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發(fā)明（設計）人: 梁鈞
• 申請（專利權）人: 新疆金正生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/02;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法。在藻種大量培養(yǎng)過程中,溫度是影響藻種生長繁殖的主要的限制因素，本發(fā)明提供了一種可以快速、大批量篩選高溫條件下能夠存活并生長的耐熱藻，能夠為藻類治沙研究提供優(yōu)良藻種，而其中采用高溫水浴處理，設定了不同溫度的處理，從而得到不同溫度下藻細胞的生長情況，為藻類生物治沙中進行藻種野外接種、噴灑時選擇適宜的環(huán)境條件和時段的提供實驗依據(jù)。

技術領域

本發(fā)明涉及沙漠藻篩選技術領域，具體為一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法。

背景技術

新疆塔克拉瑪干沙漠作為典型的內(nèi)陸干旱地區(qū)沙漠，不僅是國內(nèi)最大的沙漠，也是全世界第二大流動沙漠。存活在沙漠環(huán)境的藻類經(jīng)過長期的適應高溫、低溫、干旱、強光照、強紫外輻射等生境，進化形成了獨特的生理、生物活性，以及蘊含與之相對應的新基因。

目前，國內(nèi)外對沙漠藻耐熱性研究還比較少，而且這些研究在一個或兩個藻種的耐熱性方面進行，并未大量篩查藍藻耐熱性進行研究。有研究證明沙漠藻類在固定沙土以減少沙塵暴種具有重要作用。因此，對荒漠藻的耐熱性研究具有重要的生態(tài)學意義。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術中所存在的問題，本發(fā)明公開了一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法，包括步驟如下：

步驟一、采集沙漠土壤樣品：用無藻鏟采集沙樣表層及其以下至10cm深，收集于無菌密封袋；

步驟二、激活沙漠土壤樣品中的藻細胞：在實驗室稱取100g采集的沙漠土壤樣品置于滅菌的裝有300mL培養(yǎng)液的500mL激活容器中，充分混勻，置于光照培養(yǎng)架上培養(yǎng)2周，得到培養(yǎng)藻液；

步驟三、分離、純化與培養(yǎng)沙漠藻種：采用平板法稀釋法與劃線法分離純化步驟二中得到的培養(yǎng)藻液，分離過程中定期鏡檢培養(yǎng)藻液，直到觀察的微藻形態(tài)一致即純化成功，然后進行逐級擴大培養(yǎng)得到微藻；

步驟四、藻細胞的鑒定：借助微分干涉顯微鏡100倍油鏡下觀察步驟三培養(yǎng)得到的微藻細胞形態(tài)，對比藻類分類檢索表，鑒定藻細胞至科屬水平；

步驟五、沙漠藻細胞高溫處理：將步驟三培養(yǎng)得到的微藻細胞培養(yǎng)2周后用移液槍吸取2ml藻液接種到24孔板的每個孔里，將接種藻液的24孔板置于倒置顯微鏡下面，觀察并拍照藻細胞，然后將接種藻液的24孔板置于提前預熱好的水浴進行高溫處理；

步驟六、篩查耐高溫沙漠藻種：將高溫處理后的24孔板置于光照培養(yǎng)架子上培養(yǎng)2周，同時每隔2天用倒置顯微鏡觀察細胞生長情況并拍照記錄，然后將高溫處理后的藻細胞生長情況和細胞圖片與處理前的藻細胞生長情況和細胞圖片進行對比，將生長良好，細胞形態(tài)與顏色未發(fā)生明顯變化的藻種確定為耐高溫藻種。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，步驟一中每次采樣后用70％酒精擦拭無藻鏟，以防交叉污染。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，步驟二中激活容器所處的培養(yǎng)環(huán)境的光照強度為5000lux，光暗周期為14h/10h，溫度為28-30℃。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選方案，步驟五中的高溫處理水浴溫度范圍40–60℃，溫度梯度為5℃，誤差范圍為±1℃，每個溫度下處理3h。

本發(fā)明的有益效果：在藻種大量培養(yǎng)過程中,溫度是影響藻種生長繁殖的主要的限制因素，本發(fā)明提供了一種可以快速、大批量篩選高溫條件下能夠存活并生長的耐熱藻，能夠為藻類治沙研究提供優(yōu)良藻種，而其中采用高溫水浴處理，設定了不同溫度的處理，從而得到不同溫度下藻細胞的生長情況，為藻類生物治沙中進行藻種野外接種、噴灑時選擇適宜的環(huán)境條件和時段的提供實驗依據(jù)。

附圖說明

圖1左右圖分別為對照組藻細胞顯微鏡觀察結果和24孔板上生長結果；

圖2左右圖分別為40℃處理組細胞形態(tài)顯微鏡觀察結果和24孔板上生長結果；