[發明專利]一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法

有效

• 申請號: 202111178912.4
• 申請日: 2021-10-11
• 公開（公告）號: CN113846018B
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 梁鈞
• 申請（專利權）人: 新疆金正生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/02;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法，其特征在于，包括步驟如下：

步驟一、采集沙漠土壤樣品：用無藻鏟采集沙樣表層及其以下至10cm深，收集于無菌密封袋；

步驟二、激活沙漠土壤樣品中的藻細胞：在實驗室稱取100g采集的沙漠土壤樣品置于滅菌的裝有300mL培養液的500mL激活容器中，充分混勻，置于光照培養架上培養2周，得到培養藻液；

步驟三、分離、純化與培養沙漠藻種：采用平板法稀釋法與劃線法分離純化步驟二中得到的培養藻液，分離過程中定期鏡檢培養藻液，直到觀察的微藻形態一致即純化成功，然后進行逐級擴大培養得到微藻；

步驟四、藻細胞的鑒定：借助微分干涉顯微鏡100倍油鏡下觀察步驟三培養得到的微藻細胞形態，對比藻類分類檢索表，鑒定藻細胞至科屬水平；

步驟五、沙漠藻細胞高溫處理：將步驟三培養得到的微藻細胞培養2周后用移液槍吸取2ml藻液接種到24孔板的每個孔里，將接種藻液的24孔板置于倒置顯微鏡下面，觀察并拍照藻細胞，然后將接種藻液的24孔板置于提前預熱好的水浴進行高溫處理；

步驟六、篩查耐高溫沙漠藻種：將高溫處理后的24孔板置于光照培養架子上培養2周，同時每隔2天用倒置顯微鏡觀察細胞生長情況并拍照記錄，然后將高溫處理后的藻細胞生長情況和細胞圖片與處理前的藻細胞生長情況和細胞圖片進行對比，將生長良好，細胞形態與顏色未發生明顯變化的藻種確定為耐高溫藻種。

2.根據權利要求1所述的一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法，其特征在于：步驟一中每次采樣后用70％酒精擦拭無藻鏟，以防交叉污染。

3.根據權利要求1所述的一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法，其特征在于：步驟二中激活容器所處的培養環境的光照強度為5000lux，光暗周期為14h/10h，溫度為28-30℃。

4.根據權利要求1所述的一種快速篩選耐高溫沙漠藻種的方法，其特征在于：步驟五中的高溫處理水浴溫度范圍40–60℃，溫度梯度為5℃，誤差范圍為±1℃，每個溫度下處理3h。