[發明專利]一種定量檢測生物樣本中精神類藥物的試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202111177824.2
• 申請日: 2021-10-09
• 公開（公告）號: CN113917025A
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 孫秀佳;張晨;李華芳
• 申請（專利權）人: 上海市精神衛生中心（上海市心理咨詢培訓中心）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

1.一種同時定量檢測生物樣本中精神類藥物或其代謝物的方法，其特征在于，所述方法為采用超高效液相色譜-紫外檢測法，其特征在于，包括以下步驟：

S1色譜條件：(1)色譜柱：C₁₈色譜柱；(2)流動相：A相為甲酸-水溶液，B相為甲酸-甲醇溶液；(3)檢測器為紫外(UV)檢測器；

S2工作溶液的配制：

S21內標溶液的制備：

S211內標1-胃復安工作溶液：精密吸取適量胃復安標準品，先用少量甲醇溶解，再用甲醇-水溶液定容，配制成胃復安標準品溶液，再用甲醇-水溶液稀釋定容，即得內標1-胃復安工作溶液；

S212內標2-卡馬西平內標工作溶液：精密吸取適量卡馬西平標準品，先用少量甲醇溶解，再用甲醇-水溶液定容，配制成卡馬西平標準品溶液，再用甲醇-水溶液稀釋至定容，即得內標2-卡馬西平工作溶液；

S22混合標準品溶液的制備：

S221混標母液的配制：分別精密稱定適量精神科常用藥物或其代謝物氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脫氫阿立哌唑、奧氮平、米氮平、利培酮、9-OH利培酮、曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平，混合后先用適量溶劑溶解后，再采用甲醇-水溶液稀釋定容配制成混標母液；進一步的，所述混標母液的配制包括：分別精密稱定適量神科常用藥物或其代謝物氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脫氫阿立哌唑、奧氮平、米氮平、利培酮、9-OH利培酮、曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平1～30mg，混合后先用1～30mL溶劑溶解后，再采用40～70％v/v甲醇-水溶液稀釋定容配制成含氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脫氫阿立哌唑濃度為400μg/mL，含奧氮平、米氮平、利培酮、9-OH利培酮濃度為100μg/mL，含曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平濃度為200μg/mL的混標母液；

S222定量混合標準曲線工作溶液的配制：將上述混標母液用濃度為的40～70％v/v甲醇-水溶液按一定比例稀釋，分別配制成含上述藥物的7個濃度的標準曲線溶液，所述溶液中分別含氨磺必利、氯氮平、去甲氯氮平、阿立哌唑、脫氫阿立哌唑濃度為100、50、20、10、4、2、1μg/mL，含奧氮平、米氮平、利培酮、9-OH利培酮濃度為25、12.5、5、2.5、1、0.5、0.25μg/mL，含曲唑酮、氯丙嗪、喹硫平濃度為50、25、10、5、2、1、0.5μg/mL，即得；

S223混合標準品溶液的制備：分別精密吸取上述定量混合標準曲線工作溶液10～40μL，然后精密加入上述內標1-胃復安工作溶液以及內標2-卡馬西平工作溶液各10～40μL，干燥后加入適量空白血液、血漿、血清或唾液以及甲基叔丁基醚，第一次渦旋，然后加入100～500μL的濃度為1～3mol/L的氫氧化鈉水溶液以及甲基叔丁基醚第二次渦旋并離心，獲得上清液，將所述上清液干燥后再加入含甲酸的甲醇-水溶液復溶、渦旋、過濾，即得；

S23供試品溶液的制備包括：

S231血液、血漿、血清或唾液供試品溶液的制備：分別精密吸取S21制備的內標1-胃復安工作溶液以及內標2-卡馬西平工作溶液各10～40μL，干燥后與適量待測血液、血漿、血清或唾液混合，第一次渦旋，加入100～500μL氫氧化鈉水溶液以及甲基叔丁基醚進行第二次渦旋，渦旋后離心獲得上清液，取上清液干燥后再加入含甲酸的甲醇-水溶液復溶、渦旋、過濾即得；

或S232頭發供試品溶液的制備：分別精密吸取S21制備的內標1-胃復安工作溶液以及內標2-卡馬西平工作溶液各10～40μL，干燥后與適量待測頭發樣本混合，第一次渦旋，加入100～500μL氫氧化鈉水溶液，超聲或靜置，然后加入甲基叔丁基醚進行第二次渦旋，渦旋后離心獲得上清液，取上清液干燥后加入含甲酸的甲醇-水溶液復溶、渦旋、過濾，即得；

S3測定法：將S22制備的混合標準品溶液、以及S23制備的供試品溶液分別注入超高效液相色譜儀，采用梯度洗脫程序，分別得到7個濃度的混合標準品溶液色譜圖以及供試品溶液色譜圖，分別獲得所述精神類藥物及其代謝物標準品和供試品的保留時間t_R、峰面積積分，將所述混合標準品溶液中的濃度與其對應峰面積/內標面積比值建立標準曲線，然后根據供試品溶液的峰面積積分、上述標準曲線獲得供試品溶液的濃度。