[發(fā)明專利]一種可溶性I型膠原蛋白制備方法及其在化妝品中的應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202111176943.6
• 申請日: 2021-10-09
• 公開（公告）號: CN113736841A
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王治國
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州儷靈生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K14/78;C07K1/30;A61K8/65;A61Q19/00
• 代理公司: 徐州拉沃智佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32455
• 代理人: 李石鳳

本發(fā)明公開了一種可溶性I型膠原蛋白制備方法及其在化妝品中的應(yīng)用，所述制備方法具體步驟如下：1)制備牛筋細(xì)粒；2)復(fù)合酶水解牛筋蛋白；3)制備牛筋蛋白酶水解液2；4)制備蛋白沉淀1；5)重懸蛋白沉淀1，攪拌重溶蛋白至蛋白完全溶解；6)進(jìn)行牛筋蛋白1化學(xué)結(jié)構(gòu)的第一次改造；7)制備蛋白沉淀2；8)采用步驟6、7、8相同的方法對蛋白沉淀2進(jìn)行第二次改構(gòu)，獲得改構(gòu)沉淀蛋白3；9)制備蛋白沉淀4；10)合計洗滌蛋白3次，獲得終產(chǎn)品。本方法制得的可溶性I型膠原蛋白不僅完整保留大分子I型膠原蛋白的三維空間構(gòu)象，還克服了傳統(tǒng)牛筋膠原蛋白酶水解產(chǎn)物在中性水介質(zhì)中不溶解的缺點(diǎn)，實現(xiàn)牛筋大分子膠原蛋白在化妝品中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種可溶性I型膠原蛋白制備方法及其在化妝品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

膠原蛋白系人及動物細(xì)胞合成的一類糖蛋白生物大分子，廣泛存在于人及動物骨細(xì)胞、筋腱、皮膚、軟骨細(xì)胞等結(jié)締組織中，為皮膚、筋腱、關(guān)節(jié)滑膜組織的重要成份。迄今發(fā)現(xiàn)的膠原蛋白種類繁多、結(jié)構(gòu)復(fù)雜，常見的有Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型蛋白，其中Ⅰ型膠原蛋白是成年脊椎動物皮、肌腱中的主要膠原蛋白形式，也是目前被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)的一類生物組織材料。

各種類型膠原蛋白的基本結(jié)構(gòu)大同小異，在氨基酸序列上含有(甘氨酸-X-Y)n重復(fù)序列，這些重復(fù)序列是構(gòu)成膠原蛋白三聚體(三股螺線)功能結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)，其中X常為脯氨酸，Y為羥脯氨酸或羥賴氨酸，脯氨酸和羥脯氨酸是膠原蛋白區(qū)別其他蛋白的特征性質(zhì)。大分子膠原蛋白由3條多肽鏈組成，這三條多肽相互作用形成三重超螺旋結(jié)構(gòu)，研究證實只有這種保留大分子三股螺旋結(jié)構(gòu)的膠原蛋白才具有刺激皮膚角質(zhì)細(xì)胞增值的功效(活性)，膠原蛋白的降解產(chǎn)物，如明膠和小分子水解膠原，均不具備這種完整的三股螺旋結(jié)構(gòu)，因此不具備增值皮膚角質(zhì)細(xì)胞的功能。

現(xiàn)有的生產(chǎn)工藝是通過酸或酶水解工藝獲得的大分子牛筋I(lǐng)型膠原蛋白，在中性pH條件下具有水不溶性質(zhì)，這類產(chǎn)品主要用于一些醫(yī)藥的產(chǎn)品領(lǐng)域，如滴眼液、止血棉、醫(yī)用填料等。作為化妝品生產(chǎn)用的原料，必須在中性pH可溶且性能穩(wěn)定。因此目前市面上牛筋來源酶法制備的I型膠原蛋白不能用作化妝品的原料。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種可溶性I型膠原蛋白制備方法及其在化妝品中的應(yīng)用，其以牛跟筋為原料，采用機(jī)械法結(jié)合復(fù)合軟化酶解法去除牛跟筋多余肉組織和脂肪組織、機(jī)械粉碎后采用低溫復(fù)合酶法水解獲得酸溶性天然I膠原蛋白溶液，然后再進(jìn)行2次?；磻?yīng)，完成膠原蛋白分子結(jié)構(gòu)的改構(gòu)，由此獲得水溶性更高、親水性更強(qiáng)、蛋白穩(wěn)定性更高的具有三股螺旋的大分子(100～300KDa)活性I型膠原蛋白。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種可溶性I型膠原蛋白制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

1)選用新鮮牛筋為材料，經(jīng)過機(jī)械方法及0.01％～0.1％復(fù)合軟化酶解法，在pH6.0～7.0室溫處理2～5小時對牛筋進(jìn)行去肉脂、去筋膜處理獲得牛筋條；然后用去離子水漂洗3～6次，牛筋條經(jīng)冷凍結(jié)塊、機(jī)械粉碎獲得牛筋細(xì)粒；

2)采用去離子水按照牛筋顆粒重量的1～5％W/V投量，依據(jù)反應(yīng)液體積加入0.1～0.5％W/V復(fù)合蛋白水解酶，酶活力大于10萬IU/g，用鹽酸或醋酸調(diào)酶解反應(yīng)液的pH2.0～4.0，于6～15℃、轉(zhuǎn)速50～200rpm攪拌下酶水解2～4天，完成牛筋蛋白的復(fù)合酶水解；

3)采用8000～14000rpm,10℃低溫離心10～30min分離，獲得濃稠、透明的牛筋蛋白酶水解液；

4)按照牛筋蛋白酶水解液體積加入2.0～5.0％W/V NaCL，緩慢攪拌下沉淀出牛筋蛋白，后在3000～6000rpm 10℃離心20分鐘收集獲得蛋白沉淀1；

5)采用2～5％W/V去離子水重懸蛋白沉淀1，用醋酸或鹽酸調(diào)pH2.0～4.0，6～12℃下50～150rpm攪拌重溶蛋白至蛋白完全溶解；