[發(fā)明專利]一種養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制作用有效性的驗(yàn)證方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111176212.1
• 申請(qǐng)日: 2021-10-09
• 公開（公告）號(hào): CN113916885A
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 白玉鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成程科技集團(tuán)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N21/84
• 分類號(hào): G01N21/84;G01N1/30;G01N1/36;C12Q1/18;C12Q1/58
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本發(fā)明公開了一種養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制作用有效性的驗(yàn)證方法，具體包括如下步驟：準(zhǔn)備幽門螺桿菌菌株和實(shí)驗(yàn)小鼠；將實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行分組；進(jìn)行細(xì)菌培和動(dòng)物造模；給分組后的小鼠給藥；進(jìn)行模型檢測和模型復(fù)制評(píng)價(jià)；對(duì)小鼠進(jìn)行體征觀察；解剖小鼠并對(duì)小鼠的胃部大體形態(tài)學(xué)觀察、胃竇部粘膜組織尿素酶檢測、胃組織病理學(xué)HE染色和肝組織病理學(xué)HE染色；根據(jù)體征觀察結(jié)果、胃部大體形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果、胃竇部粘膜組織尿素酶檢測結(jié)果、胃組織病理學(xué)HE染色后觀察結(jié)果和肝組織病理學(xué)HE染色后觀察結(jié)果判斷養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制作用有效性。本驗(yàn)證方法可以科學(xué)、有效、全面的校驗(yàn)養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)菌抑制技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制作用有效性的驗(yàn)證方法。

背景技術(shù)

幽門螺旋桿菌是革蘭氏陰性、微需氧的細(xì)菌，生存于胃部及十二指腸的各區(qū)域內(nèi)。它會(huì)引起胃黏膜輕微的慢性發(fā)炎，甚或?qū)е挛讣笆改c潰瘍與胃癌。生活中適量酒精度數(shù)的酒對(duì)細(xì)菌有一定的抑制作用，而高濃度的酒精更被醫(yī)學(xué)上用作消毒使用。現(xiàn)有的許多酒品廠家宣傳其養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌有抑制作用，但大多未被科學(xué)的驗(yàn)證。因此，需要一種驗(yàn)證方法來驗(yàn)證酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制作用有效性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制作用有效性的驗(yàn)證方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種養(yǎng)生酒對(duì)幽門螺旋桿菌抑制作用有效性的驗(yàn)證方法，具體包括如下步驟：

(1)、準(zhǔn)備充足的幽門螺桿菌國際標(biāo)準(zhǔn)菌株，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)小鼠70只，18～22g，雌雄各半；

(2)、分組：將所有小鼠隨機(jī)分為7組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性藥物組、養(yǎng)生酒高劑量組、養(yǎng)生酒低劑量組及普通白酒高劑量組、普通白酒低劑量組，每組10只，再將實(shí)驗(yàn)小鼠先適應(yīng)性喂養(yǎng)一周；

(3)、細(xì)菌培養(yǎng)：將幽門螺桿菌菌株在超凈工作臺(tái)中以每個(gè)平板100ul菌懸液的量劃線接種于哥倫比亞血瓊脂平板上，待菌液在培養(yǎng)基上吸干后，將培養(yǎng)基倒置放于厭氧培養(yǎng)袋中，而后迅速將微需氧產(chǎn)氣包放入培養(yǎng)袋中并密封，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48～72h；待細(xì)菌長滿平板，挑取典型菌落進(jìn)行幽門螺桿菌菌株試紙鑒定，試紙顏色由黃變紫后，用生理鹽水輕輕洗下菌落，測量菌液OD值；

(4)、動(dòng)物造模：采用培養(yǎng)并收集的幽門螺桿菌菌株，菌懸液濃度用生理鹽水調(diào)節(jié)為1×10⁹CFU/ml；造模前將小鼠禁食不禁水24h，除空白組外均先灌胃5％碳酸氫鈉0.2ml/只，30min后再灌胃給予幽門螺桿菌菌液0.2ml/只/次，灌胃后再禁食禁水3h，之后正常攝食飲水；隔天感染一次，共8次；空白對(duì)照組給予等量生理鹽水；

(5)、給藥：造模結(jié)束后開始給藥，給陽性藥物組喂食陽性藥物，養(yǎng)生酒高劑量組喂食49.4ml/kg的養(yǎng)生酒，養(yǎng)生酒低劑量組喂食24.7ml/kg的養(yǎng)生酒，普通白酒高劑量組喂食與養(yǎng)生酒同度數(shù)的普通白酒49.4ml/kg，普通白酒低劑量組喂食與養(yǎng)生酒同度數(shù)的普通白酒24.7ml/kg，其中均以0.2ml/10g/只灌胃給藥，空白組及模型組灌胃給予等量生理鹽水，每天一次，連續(xù)給藥20天；給藥期間各組自由飲水，正常進(jìn)食；

(6)、模型檢測：末次灌胃菌液2h后脫頸處死小鼠，快速完整取胃，觀察胃部形態(tài)變化；將胃沿胃大彎剪開，展平于手術(shù)臺(tái)上，小心刮取胃黏膜組織進(jìn)行尿素酶試紙檢測；

(7)、模型復(fù)制評(píng)價(jià)：若模型小鼠尿素酶試紙檢測試紙由黃變紫，結(jié)果呈顯陽性；空白組小鼠試紙檢測呈陰性，空白小鼠胃紅潤光澤，整體完整無變形，；而模型組小鼠，胃外部呈現(xiàn)深紫色，表面皺縮、凹凸不平，出現(xiàn)明顯病變；將胃沿胃大彎展開后，可見模型組出現(xiàn)點(diǎn)星狀出血，可判斷模型復(fù)制成功；

(8)、體征觀察：實(shí)驗(yàn)過程中，各組小鼠均常規(guī)飼養(yǎng)，正常進(jìn)食飲水，期間定期觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體征情況；