[發明專利]一種嗜粘蛋白-艾克曼菌的特征肽及其應用

有效

• 申請號: 202111175902.5
• 申請日: 2021-10-09
• 公開（公告）號: CN114106101B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發明（設計）人: 高神駿;馮麗君;高其康;樓兵干
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K7/06;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發明公開了一種嗜粘蛋白?艾克曼菌的特征肽及其應用。本發明研究發現了嗜粘蛋白?艾克曼菌(Akkermansia muciniphila)的特征性多肽，能夠用于嗜粘蛋白?艾克曼菌檢測鑒定，本發明所提供的特征性多肽的氨基酸序列為LLDEGQAGDNVGLLLR、LMPVEDVFSISGR、VDFNVPLK和TAAEYDNYR中的至少一種，該特征性多肽為嗜粘蛋白?艾克曼菌所特有，可用液相色譜串聯質譜進行鑒定。該方法具有特異性強，靈敏度高，能夠準確的鑒定嗜粘蛋白?艾克曼菌。

技術領域

本發明涉及微生物檢測技術領域，特別是涉及一種嗜粘蛋白-艾克曼菌的特征肽及其應用。

背景技術

嗜粘蛋白-艾克曼菌(Akkermansia muciniphila，縮寫：AKKM8)是一種定植在人消化胃腸道粘膜上，可特異性降解粘蛋白的革蘭氏陰性嚴格厭氧菌。2004年由Derrien等從人體糞便中分離得到，占腸道總細菌的比率約為1％～5％，能刺激機體黏液層增厚，以維持機體健康狀況。有報道發現在炎癥性腸病、自閉癥、肥胖或先天性過敏癥等疾病的人群中較低，其定植情況是機體健康水平的標志之一。

如公開號為CN110227085A的發明專利公開了一種Akkermansia muciniphila菌在制備防治抑郁癥的藥物或保健品中的應用。該發明對Akkermansia muciniphila(縮寫：AKKM8)菌在抑郁發病和抗抑郁中的作用進行了體內藥效學研究，結果顯示抑郁癥患者腸道內的Akkermansia muciniphila豐度明顯降低。動物實驗結果顯示，抑郁小鼠腸道Akkermansia muciniphila豐度顯著降低。本發明對抑郁小鼠模型給予Akkermansiamuciniphila菌移植，實驗表明，Akkermansia muciniphila菌移植可提升小鼠的運動距離并減少懸尾實驗和強迫游泳實驗的不動時間，顯著緩解小鼠的抑郁狀態，顯示出了很好的抗抑郁療效，且未見副作用。

更多的現有技術公開是嗜粘蛋白-艾克曼菌在治療或預防糖尿病方面的應用(公開號：CN105030841A)，制備治療或預防肥胖癥方面應用(公開號：CN105106245A，CN111938158A)、預防和治療抑郁癥的藥物或保健品中的應用(公開號：CN110693917A，CN110227085A)、預防和治療代謝疾病應用(公開號：CN110964650A，CN111603488A)、嗜黏蛋白-艾克曼菌的培養基(公開號：CN110079474A)。

以上所有在人類疾病中的應用，其前提要有一種檢測人類消化道中嗜粘蛋白-艾克曼菌是否存在，含量變化如何的手段。2017年張玲等(張玲,陳雯杰,秦倩倩,等.腸道細菌Akkermansia muciniphila核酸適配體的篩選[J].現代預防醫學,2017(17):142-147.)通過核酸適配體篩選的方法獲得了2條對嗜粘蛋白-艾克曼菌有較高親和力的高頻核酸序列適配體，可用于嗜粘蛋白-艾克曼菌的鑒定。秦倩倩等(秦倩倩,張玲,王國慶.實時熒光PCR定量檢測糞便中Akkermansia muciniphila方法研究[J].四川大學學報:醫學版,2018(1):93-97.)2018年采用上游引物5-CAGCACGTGAAGGTGGGGAC-3和下游引物5-CCTTGCGGTTGGCTTCAGAT-3對糞便中的嗜粘蛋白-艾克曼菌進行實時熒光定量PCR檢測，但到目前為止，利用嗜粘蛋白-艾克曼菌特有的多肽序列進行色質譜鑒定還未見文獻報道。

發明內容

本發明的目的是針對上述問題，提出一組可用于嗜粘蛋白-艾克曼菌鑒定的特征性多肽，以及一種嗜粘蛋白-艾克曼菌特有的特征性多肽的液相色譜質譜鑒定方法，它具有唯一性強，靈敏度高，能精確鑒別樣本中是否含有嗜粘蛋白-艾克曼菌。