[發明專利]一種發酵用嗜熱鏈球菌，篩選方法及其在櫻桃酵素發酵中的應用

在審

• 申請號: 202111168006.6
• 申請日: 2021-10-08
• 公開（公告）號: CN114317316A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 馮啟勇;蘇政波;趙宏偉;劉寶祥;孫兆喜
• 申請（專利權）人: 山東綠豐生態農業股份有限公司;山東省食品發酵工業研究設計院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/14;A23L33/00;C12R1/46
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 劉彬

1. 一種嗜熱鏈球菌LVF02，保藏號為CCTCC M 20211096。

2.如權利要求1所述的嗜熱鏈球菌的篩選方法，其特征在于，按照以下步驟進行：

(1)采摘新鮮、成熟的櫻桃果實，去核后加入無菌水，通過均質器制成櫻桃漿；富集培養，得發酵液；

(2)取發酵液用無菌水稀釋，得到發酵液的稀釋液；

(3)將所述發酵液的稀釋液200μl涂布于20ml～30mlMRS培養基中培養，隨機選取單菌落，采用平板劃線1～3次分離得到單菌落，經鑒定為嗜熱鏈球菌；

(4)將嗜熱鏈球菌進行產酸性能分析、發酵性能分析，篩選出發酵用嗜熱鏈球菌株；

所述MRS培養基為：蛋白胨10g，牛肉浸粉8g，酵母浸粉4g，葡萄糖20g，磷酸氫二鉀2g，檸檬酸氫二銨2g，乙酸鈉5g，硫酸鎂0.2g，硫酸錳0.04g，吐溫80 1g，瓊脂粉20g，加入1L純凈水，溶解后調節pH至5.7±0.2，121℃滅菌20min。

3.如權利要求2所述的嗜熱鏈球菌的篩選方法，其特征在于，步驟1）所述櫻桃果實與無菌水的質量比為1:1～10。

4.如權利要求2所述的嗜熱鏈球菌的篩選方法，其特征在于，所述富集培養是在溫度為35～45℃條件下，發酵36～48h。

5.如權利要求2所述的嗜熱鏈球菌的篩選方法，其特征在于，所述稀釋為將發酵液與無菌水按照體積比為1:10～100進行稀釋。

6.如權利要求1所述嗜熱鏈球菌的篩選方法，其特征在于，所述培養條件為溫度35℃～45℃，時間2～5天。

7.如權利要求1所述嗜熱鏈球菌的篩選方法，其特征在于，產酸性能分析和發酵性能分析為：取一環嗜熱鏈球菌加入到100ml～300ml櫻桃漿中，在35℃～45℃培養12～72h，測定櫻桃漿中的總酸含量和嗜熱鏈球菌菌落數。

8. 如權利要求6所述嗜熱鏈球菌的篩選方法，其特征在于，櫻桃漿中的總酸含量6g/L；嗜熱鏈球菌菌落數2.00×10⁷ cfu/mL。

9.一種嗜熱鏈球菌在櫻桃酵素中的應用，其特征在于，將上述權利要求制備的嗜熱鏈球菌應用于櫻桃酵素中，按照以下步驟進行：

（a）成熟度較好的100g櫻桃經過去核后，加入2～10倍純凈水進行打漿，得櫻桃漿；取100mL櫻桃漿加入到250mL三角瓶中，92℃滅菌20min，得滅菌櫻桃漿；

（b）從嗜熱鏈球菌斜面取1～3環接種于滅菌櫻桃漿中，35℃～45℃靜置培養12～24h，作為種子液；

（c）按照5～10%的體積比接種種子液于步驟（a）的滅菌櫻桃漿中，在35℃～45℃靜置培養12～72h，得到櫻桃酵素。

10. 如權利要求9所述嗜熱鏈球菌在櫻桃酵素中的應用，其特征在于，步驟（c）中培養72h，櫻桃酵素中維生素C25mg/100mL，花青素240mg/L，氨基酸總量840mg/100mL，總酸8g/L，菌落數2.00×10⁷ cfu/mL。