[發(fā)明專利]一種同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111164758.5
• 申請日: 2021-09-30
• 公開（公告）號: CN113866409A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 戚何妹;陶鑄;容志恩;亢中奎;丁文婷;秦莉;陳小平
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州中科藍華生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N15/14
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 劉二艷

1.一種同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒，其特征在于，所述同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒包括抗體組合物；

所述抗體組合物包括表面抗體組合物和胞內(nèi)抗體組合物；

所述表面抗體組合物包括Zombie NIR、CD45、Ly6G、CD11b、F4/80、Ly6c、NK1.1、CD3、CD4、CD25、CD8a、CD19、CD11c、CD80或CD206中的至少兩種的組合；

所述胞內(nèi)抗體組合物包括FoxP3、IL-10、Granzyme B、Perforin或IFN-γ中的至少兩種的組合。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒，其特征在于，以重量份數(shù)計，所述抗體組合物包括：Zombie NIR 0.05～0.2份、CD45 0.2～0.5份、Ly6G 0.2～0.5份、CD11b 0.2～0.5份、F4/80 0.5～0.7份、Ly6c 0.05～0.1份、NK1.1 0.1～0.8份、CD3 0.1～0.5份、CD4 0.1～0.3份、CD25 0.05～0.3份、CD8a 0.1～0.5份、CD19 0.1～0.5份、CD11c 0.5～3份、CD80 1～4份、CD206 0.5～3份、FoxP3 0.3～0.8份、IL-10 2～5份、Granzyme B 0.1～0.5份、Perforin 3～8份和IFN-γ3～8份。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒，其特征在于，以重量份數(shù)計，所述抗體組合物包括：Zombie NIR 0.08～0.15份、CD45 0.2～0.4份、Ly6G 0.2～0.4份、CD11b 0.2～0.4份、F4/80 0.5～0.65份、Ly6c 0.06～0.1份、NK1.1 0.4～0.7份、CD3 0.1～0.4份、CD4 0.1～0.2份、CD25 0.05～0.2份、CD8a 0.1～0.4份、CD190.1～0.4份、CD11c 0.5～2份、CD80 1～3份、CD206 0.5～2份、FoxP3 0.3～0.6份、IL-10 2～4份、Granzyme B 0.1～0.4份、Perforin 3～6份和IFN-γ3～6份。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒，其特征在于，所述同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒還包括封閉劑、破膜液和上機緩沖液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4所述的同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒，其特征在于，所述細胞包括CD4 T細胞、CD8 T細胞、Treg細胞、雙陰T細胞、粒細胞、巨噬細胞、B細胞、NK細胞、MDSC細胞或DC細胞中的任意一種或至少兩種的組合。

6.一種檢測免疫細胞亞群變化的方法，其特征在于，所述檢測免疫細胞亞群變化的方法包括使用權(quán)利要求1～5任一項所述的同時檢測多種細胞亞群及功能變化的試劑盒進行檢測。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測免疫細胞亞群變化的方法，其特征在于，所述方法包括：

制備單細胞懸液，使用封閉劑封閉后，再使用表面抗體組合物染色，洗滌后重懸細胞，加入破膜液處理，再加入胞內(nèi)抗體組合物，孵育后去上清，使用上機緩沖液重懸后，上機檢測，并進行分析。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測免疫細胞亞群變化的方法，其特征在于，所述上機檢測使用的流式細胞儀為全光譜流式細胞儀；

優(yōu)選地，所述分析包括：

細胞門內(nèi)去除細胞碎片，再去除黏連細胞；

設(shè)置多種細胞門，檢測多個細胞亞群的表達情況。