[發明專利]一種ASB17在制備TRAF6相關炎癥性疾病藥物中的用途

在審

• 申請號: 202111161621.4
• 申請日: 2021-09-30
• 公開（公告）號: CN113769099A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 吳建國;楊戈;萬品;潭秋萍
• 申請（專利權）人: 佛山病原微生物研究院
• 主分類號: A61K45/06
• 分類號: A61K45/06;A61P29/00;G01N33/68
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 張曉博

1.一種ASB17在制備TRAF6相關炎癥性疾病藥物中的用途。

2.如權利要求1所述的ASB17在制備TRAF6相關炎癥性疾病藥物中的用途，其特征在于，所述ASB17的Human ASB17 Sequence.txt序列如SEQ ID NO：1所示，所述ASB17的MouseASB17 Sequence.txt序列如SEQ ID NO：2所示。

3.一種應用如權利要求1～2任意一項所述的ASB17在制備TRAF6相關炎癥性疾病藥物中的用途的驗證ASB17制備治療TRAF6相關炎癥性疾病藥物的方法，其特征在于，所述驗證ASB17制備治療TRAF6相關炎癥性疾病藥物的方法包括以下步驟：

步驟一，小鼠原代細胞BMDCs和BMDMs分離；

步驟二，蛋白質免疫印跡、免疫共沉淀以及免疫熒光；

步驟三，蛋白質穩定性檢測及泛素化實驗。

4.如權利要求3所述的驗證ASB17制備治療TRAF6相關炎癥性疾病藥物的方法，其特征在于，步驟一中，所述小鼠原代細胞BMDCs和BMDMs分離，包括：

(1)分離小鼠骨髓來源樹突狀細胞BMDCs

準備6到8周齡的野生小鼠和ASB17^-/-小鼠，無菌條件下，取出所有股骨和脛骨，在70％酒精的中浸泡5min，PBS洗2次；用注射器吸取PBS沖洗骨髓至培養皿中，至骨完全變為白色；細胞懸液過濾，離心，RPMI 1640培養基(包含20ng/ml GM-CSF)重懸，100mm細胞培養皿中培養；第3天，向培養皿中再加入10ml RPMI 1640培養基；第6天和第8天，培養液離心后用完全培養液重懸細胞沉淀，隨后鋪至原細胞皿；第10天得到BMDCs；

(2)分離小鼠骨髓來源巨噬細胞BMDMs

準備6到8周齡的野生小鼠和ASB17^-/-小鼠，無菌條件下，取出所有股骨和脛骨并在70％酒精的中浸泡5min，PBS洗2次；用注射器反復沖洗出骨髓至培養皿中，至骨變白；懸液過濾，再離心，用紅細胞裂解液除去紅細胞；向培養皿中加入RPMI 1640培養基；第3天和第5天換為新鮮RPMI 1640培養基，第6天即為BMDMs。

5.如權利要求3所述的驗證ASB17制備治療TRAF6相關炎癥性疾病藥物的方法，其特征在于，步驟二中，所述蛋白質免疫印跡，包括：

用裂解液處理細胞，并超聲破碎后，再用Bradford法測定細胞蛋白的濃度；得到的細胞裂解液經過處理后，在8～12％的SDS-PAGE膠中跑膠2h，SDS-PAGE膠上跑開的蛋白質經轉膜設備，經2h轉到NC膜上；將NC膜用5％的脫脂牛奶封閉，經過一抗4℃孵育過夜和二抗室溫孵育1h，再由化學顯色液顯色，最后通過化學發光儀觀察目的蛋白條帶；其中，所述脫脂牛奶由PBST配制。