[發明專利]一種制備高抗氧化活性榛仁肽的方法

在審

• 申請號: 202111159419.8
• 申請日: 2021-09-30
• 公開（公告）號: CN113832209A
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 劉春雷;宋文天;閔偉紅;傅俊曦;曾琦
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12P21/00;C07K1/113;C07K1/14
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責任公司 22201
• 代理人: 劉世純;王恩遠

一種制備高抗氧化活性榛仁肽的方法，屬于肽的修飾技術領域。是以榛仁為原料，采用酶控制水解技術制備抗氧化肽，在酶解之前通過對原料進行超聲處理，再對榛仁肽進行轉谷氨酰胺酶糖基化修飾，經此處理后得到的榛仁肽DPPH清除能力顯著高于未修飾的榛仁肽。本發明反應效率高，安全無害，是一種綠色的酶法糖基化修飾，節省時間的同時又降低了生產成本，產物活性能得到大幅度提升，是對榛仁在食品與醫藥工業適用性的關鍵突破，也是對榛子資源的綜合利用具有極大的意義。修飾后高抗氧化活性榛仁肽作為保健品以及食品的原料，具有很高的抗氧化活性，可用于相關疾病的預防。

技術領域

本發明屬于肽的修飾技術領域，具體涉及一種制備高抗氧化活性榛仁肽的方法。

背景技術

氧化反應產生的自由基和活性氧促進了許多細胞成分中的變性反應，這導致癌癥、阿爾茨海默氏癥、炎癥、心血管疾病和糖尿病等許多疾病的發生。此外，自由基氧化直接影響食品質量，如風味和質地的改變將縮短食物的保質期。因此，抗氧化劑的添加是對這些疾病的治療和防止食物氧化酸敗的有效手段。源自食物蛋白質的生物活性肽比藥物具有更高的安全性，能在臨床試驗中作為單藥治療，且無副作用。抗氧化肽是一類具有清除自由基功能的肽類，可直接加到食品中，延長食品保質期，減緩機體衰老。

目前抗氧化肽生產主要采用酶水解法。這種方法仍然限制在較低的酶促利用率、較低的基材轉化率和更長的酶解時間等方面，導致對蛋白質資源的綜合利用產生不利影響，而且酶解得到的粗肽并不能完全達到人們對其活性的需求。因此，為進一步提高肽的生物學效用，有必要對其結構作進一步的修飾處理。超聲波可以改變蛋白質的物理和功能性，通過影響結合位點與酶切位點的暴露有助于蛋白質酶水解，從而提高酶解效率、蛋白轉化率、酶利用率和肽的生物活性。食品蛋白質的糖基化修飾，使糖基化蛋白既具有蛋白質的功能特性，又具有糖類物質的親水特性，并且抗氧化性等功能特性也有不同程度的改善。轉谷氨酰胺酶途徑糖基化具有反應條件溫和、無副產物等優點，可賦予蛋白質良好的功能特性，具有良好的應用前景。

因此本發明將兩種方法有機結合，對生物活性肽進行分子修飾，協同提高生物活性肽的抗氧化活性。榛子中蛋白質含量大概占15-30％，榛子蛋白是榛子油加工行業的主要副產品，大部分被丟棄或用作動物飼料，油脂加工副產物脫脂粕中蛋白含量高達40％以上。以榛仁為原料制備的肽具有抗氧化、降血壓、降血脂和抗疲勞等作用，可廣泛地應用在食品與醫藥中。以其為原料進行各種活性肽的開發，將對榛子資源的綜合利用具有極大的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種制備高抗氧化活性榛仁肽的方法，其步驟如下：

(1)榛仁肽制備

取榛子粕加入蒸餾水，配置成榛子粕質量濃度2％～35％的溶液，在功率100～2400w、溫度20～60℃下超聲預處理10～60min，再在90～96℃水浴10～20min使蛋白變性；然后冷卻至室溫，用0.5mol/L NaOH調pH值7～10，再加入堿性蛋白酶Alcalase 2.4L，加酶量4000～15000U/g榛子粕，在40～65℃下酶解2～5h，酶解過程中持續加入NaOH保持pH值不變，反應結束后迅速于85～95℃加熱10～20min使酶滅活，然后冷卻至室溫，用0.5mol/LHCl調節pH值至中性后5000～8000r/min離心10～20min，上清液冷凍干燥(-50～-30℃冷凍干燥20～30h)后得到榛仁肽，4℃保存；

(2)榛仁肽修飾

將步驟(1)冷凍干燥后的榛仁肽加入蒸餾水配成榛仁肽質量濃度2％～30％的溶液，用0.5mol/L NaOH調pH值6～10，然后加入轉谷氨酰胺酶，加酶量為1～15U/g榛仁肽，再添加榛仁肽質量0.2～2.0倍的含有氨基的糖，于30～50℃水浴中反應2～5h，反應結束后迅速于70～80℃加熱10～20min使酶滅活，冷凍干燥(-50～-30℃冷凍干燥20～30h)后得到高抗氧化活性榛仁肽，4℃保存。

榛仁肽的原料可以為川榛、刺針、毛榛、平榛、華榛、大果榛、尖榛、歐洲榛、美洲榛或土耳其榛。