[發(fā)明專利]一種用于氨基糖苷類藥物基因突變檢測(cè)的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111157991.0
• 申請(qǐng)日: 2021-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN113637743A
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃守鋒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州源河醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;G16B20/50;G06K9/62
• 代理公司: 上海領(lǐng)匠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31404
• 代理人: 湯蔚莉

本發(fā)明提供了一種用于氨基糖苷類藥物基因突變檢測(cè)的試劑盒。該試劑盒包含線粒體基因MT?RNR1的2個(gè)熱點(diǎn)變異m.1494CT和m.1555AG。本發(fā)明能夠低成本、精準(zhǔn)快速、高效便捷的對(duì)m.1494CT和m.1555AG進(jìn)行檢測(cè)，采用的微陣列芯片技術(shù)，延續(xù)了傳統(tǒng)基因芯片的高敏感性和特異性，易于在臨床進(jìn)行推廣應(yīng)用，能夠快速在新生兒階段對(duì)m.1494CT和m.1555AG進(jìn)行篩查，有效“防”止孩子“一針致聾”的發(fā)生。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種用于氨基糖苷類藥物基因突變檢測(cè)的試劑盒。

背景技術(shù)

氨基糖苷類藥物包括慶大霉素、鏈霉素、卡那霉素等等，在臨床上主要用于治療革蘭氏陰性菌引起的感染和結(jié)核桿菌感染，其藥物作用機(jī)理是直接與細(xì)菌的16S rRNA結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌蛋白翻譯錯(cuò)誤或者蛋白質(zhì)合成提前終止而達(dá)到抗菌效果。研究顯示，部分?jǐn)y帶有12S rRNA基因 m.1494CT和m.1555AG突變的兒童，其12S rRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生與細(xì)菌16SrRNA相同的變化，當(dāng)使用正常劑量或者微量的氨基糖苷類藥物時(shí)，會(huì)結(jié)合人體的12S rRNA，耳細(xì)胞線粒體蛋白質(zhì)合成異常，減少ATP的合成量，進(jìn)一步無(wú)法維持內(nèi)耳的離子梯度，造成血管紋、內(nèi)淋巴液、毛細(xì)胞內(nèi)的離子濃度不平衡，最終導(dǎo)致毛細(xì)胞的死亡，誘導(dǎo)耳聾的發(fā)生，造成永久性聽力損傷。并且這兩個(gè)突變位點(diǎn)對(duì)氨基糖苷類藥物的毒副作用極其敏感，還可以引起耳蝸、前庭等關(guān)鍵性聽力器官發(fā)生嚴(yán)重“病變”，導(dǎo)致不可挽回的損害。

由于氨基糖苷類藥物常在兒童身上使用，我國(guó)每年有2~3萬(wàn)兒童因此而致聾，給無(wú)數(shù)家庭帶來了終身的遺憾。由于攜帶這兩個(gè)基因突變的孩子在用藥前沒有任何癥狀，要避免“一針致聾”的唯一途徑在于“防”，即通過基因檢測(cè)提前確定是否攜帶這兩個(gè)突變，越早發(fā)現(xiàn)越好，從而在今后的人生中避免服用此類藥物。

目前的檢測(cè)方法有很多，包括Sanger測(cè)序、熒光定量PCR、核酸質(zhì)譜、測(cè)序法和基因芯片。從專利情況看，PCR類方法為主，CN107881229A、CN112852948A以及CN111172250A等公布了基于PCR設(shè)計(jì)引物的方法檢測(cè)這兩個(gè)突變，確實(shí)操作簡(jiǎn)便，效率高、成本低，但判讀結(jié)果容易受樣本濃度、純度等因素的影響，而且檢測(cè)樣本數(shù)受檢測(cè)通道限制。Sanger法為低通量技術(shù)手段，一次只能檢測(cè)少量樣本，不利于高效篩查這兩個(gè)突變。測(cè)序法可以進(jìn)行高通量的基因檢測(cè)，結(jié)果準(zhǔn)確，但測(cè)序成本較高，結(jié)果的判讀還存在困難，不適合臨床推廣。傳統(tǒng)點(diǎn)樣法制成的基因芯片法具有高通量的優(yōu)點(diǎn)，但易出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性等缺點(diǎn)。

因此臨床上需要一種低成本、精準(zhǔn)快速、高效便捷、易于推廣的試劑盒，在新生兒階段對(duì)氨基糖苷類藥物基因突變位點(diǎn)m.1494CT和m.1555AG進(jìn)行快速、準(zhǔn)確檢測(cè)，有效“防”止孩子“一針致聾”的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有基因突變檢測(cè)手段存在的問題，本發(fā)明提供了一種針對(duì)氨基糖苷類藥物基因突變m.1494CT和m.1555AG的檢測(cè)試劑盒，采用微陣列芯片法進(jìn)行試劑盒的發(fā)明。

具體的，本發(fā)明所述試劑盒包括氨基糖苷類藥物相關(guān)基因MT-RNR1上的兩個(gè)突變位點(diǎn)m.1494CT和m.1555AG。

所述突變位點(diǎn)每個(gè)設(shè)計(jì)1個(gè)探針，正義鏈和反義鏈方向均可設(shè)計(jì)。

進(jìn)一步的，所述探針序列如SEQ ID No.1~ SEQ ID No.2所示（表1），用于雜交捕獲這兩個(gè)突變位點(diǎn)。

表1氨基糖苷類藥物基因突變探針