[發明專利]一種3’-唾液酸乳糖的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202111157620.2
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113899827A
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 姚建銘;王力;袁麗霞;陳祥松;吳金勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;郝傳鑫

本發明涉及生物檢測技術領域，具體公開了一種3’?唾液酸乳糖的檢測方法及其應用。該檢測方法包括：稱取3’?唾液酸乳糖標準品，用流動相超聲溶解，配置標準工作溶液；對標準工作溶液采用高效液相色譜，建立標準曲線；取酶催化生產中的溶液置于沸水浴中加熱，沉淀高分子物質，離心取上清液，用流動相稀釋，過一次性有機系微孔濾膜，采用高效液相色譜對過濾后的溶液進行不同組分的分離，并利用標準曲線，進行定量分析，實時測定溶液中的3’?唾液酸乳糖。本發明通過將酶催化生產中的溶液進行熱處理、超速離心、流動相溶解和有機膜過濾等技術手段，提高了3’?唾液酸乳糖測定的準確度，其回收率也更大。本發明的檢測方法簡單快捷，高效準確。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其是涉及一種生物酶催轉化液等復雜生物溶液體系中3’-唾液酸乳糖的檢測方法及其應用。

背景技術

人乳寡糖(HMOs)是人類母乳中僅次于乳糖和脂肪的第3大固體組分，不僅種類多，且含量較高，特別是在分娩后的初乳中，有著牛乳、羊乳等其他動物的母乳遠所不如的寡糖含量。現已證實，HMOs具有效益生元作用，可以選擇性刺激腸道內有益菌的生長，間接抑制有害菌的生長，維持腸道微生態平衡，從而最大限度地降低消化道疾病的發生，進而改善宿主嬰兒的健康狀況，這種循序漸進、立體和全方位的保護兼培養性功能，為新生兒消化系統的發育和成熟提供了寶貴的時間和良好的環境。唾液酸寡糖就是含有一個或若干個唾液酸分子的一類寡糖化合物，廣泛分布在各種生物組織中，具有重要的生物信息傳遞等功能。同時作為HMOs中最主要的兩種寡糖組成之一，唾液酸寡糖也表現出了獨特的生理活性和優越的市場潛力。HMOs中唾液酸寡糖的主要存在形式有兩種：3’-SL和6’-SL，他們分別由α-2,3和α-2,6唾液酸糖基轉移酶催化一分子唾液酸和一分子乳糖脫水縮合而成。

目前，唾液酸乳糖的生產工藝以生物酶催轉化為主，現如今檢測3’-SL的方法不僅耗時較長，而且不能對3’-SL進行定量，因此，在酶催合成過程以及后續的分離工藝中，亟需一種快速準確的3’-SL定量檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種生物酶催轉化液等復雜生物溶液體系中3’-唾液酸乳糖的檢測方法及其應用，該檢測方法簡單快捷，同時高效準確，還可以準確地對3’-唾液酸乳糖定量。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

第一目的，本發明提供了一種3’-唾液酸乳糖的檢測方法，包括以下步驟：

S1、稱取3’-唾液酸乳糖標準品，用流動相超聲溶解，配置濃度為0.1～1.0g/L的標準工作溶液；

S2、對標準工作溶液采用高效液相色譜，建立標準曲線；

S3、取酶催化生產中的溶液置于沸水浴中加熱，沉淀高分子物質，然后將沉淀后的溶液離心，取上清液，用流動相稀釋，過一次性有機系微孔濾膜，采用高效液相色譜對過濾后的溶液進行不同組分的分離，并利用標準曲線，進行定量分析，實時測定溶液中的3’-唾液酸乳糖。

采用本發明的檢測方法，可以實時測定酶催生產的3’-唾液酸乳糖，及穩定3’-唾液酸乳糖的最終產量，并且，本發明的檢測方法測定3’-唾液酸乳糖的準確度高，并且獲得的3’-唾液酸乳糖回收率較高。

作為本發明所述3’-唾液酸乳糖的檢測方法的優選實施方式，高效液相色譜采用4.6×250mm，5μm的TSKgel Amide-80色譜柱，以濃度為8～10mmol/L的甲酸銨溶液和乙腈為流動相；流動相流速為0.9～1.1ml/min；柱溫50～60℃；進樣量10～20μl；吸收波長210nm。

作為本發明所述3’-唾液酸乳糖的檢測方法的優選實施方式，所述甲酸銨溶液的制備步驟包括：取甲酸銨晶體粉末，加入純水，配置8～10mmol/L的甲酸銨溶液，超聲混勻，然后加入甲酸，調節甲酸銨溶液的pH為3.5～5.5，更優選地，調節甲酸銨溶液的pH為4.0。