[發明專利]一種3’-唾液酸乳糖的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202111157620.2
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113899827A
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 姚建銘;王力;袁麗霞;陳祥松;吳金勇
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;郝傳鑫

1.一種3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、稱取3’-唾液酸乳糖標準品，用流動相超聲溶解，配置濃度為0.1～10g/L的標準工作溶液；

S2、對標準工作溶液采用高效液相色譜，建立標準曲線；

S3、取酶催化生產中的溶液1～2ml置于沸水浴中加熱，沉淀高分子物質，然后將沉淀后的溶液離心，取上清液，用流動相稀釋，過一次性有機系微孔濾膜，采用高效液相色譜對過濾后的溶液進行不同組分的分離，并利用標準曲線，進行定量分析，實時測定溶液中的3’-唾液酸乳糖。

2.如權利要求1所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，高效液相色譜采用4.6×250mm，5μm的TSKgelAmide-80色譜柱，以濃度為8～10mmol/L的甲酸銨溶液和乙腈為流動相；流動相流速為0.9～1.1ml/min；柱溫50～60℃；進樣量10～20μl；吸收波長210nm。

3.如權利要求2所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，所述甲酸銨溶液的制備步驟包括：取甲酸銨晶體粉末，加入純水，配置8～10mmol/L的甲酸銨溶液，超聲混勻，然后加入甲酸，調節甲酸銨溶液的pH為3.5～5.5，更優選地，調節甲酸銨溶液的pH為4.0。

4.如權利要求2所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，甲酸銨溶液和乙腈的體積比為(2～8)：(2～8)。

5.如權利要求4所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，甲酸銨溶液和乙腈的體積比為3：7。

6.如權利要求1所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3中，加熱溫度為70～100℃，加熱時間為3～10min。

7.如權利要求6所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，加熱溫度為100℃，加熱時間為5min。

8.如權利要求1所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，所述步驟S3中，離心速度為12000rpm，離心時間為3～10min。

9.如權利要求1所述的3’-唾液酸乳糖的檢測方法，其特征在于，所述步驟S1中，標準工作溶液的濃度分別為：0.1g/L、0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L和1.0g/L。

10.如權利要求1～9任一項所述的檢測方法在評估酶催化生產的3’-唾液酸乳糖的實時產量及最終穩定產量中的應用。