[發明專利]一種基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法及其應用

在審

• 申請號: 202111156963.7
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113755608A
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 丁向東;蔣堯;劉華濤;鄒全;李淑娟
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/113;C12N15/12;C12N15/85;C12N15/877;A01K67/027
• 代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797
• 代理人: 李斌

本發明涉及一種基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法及其應用，采集妊娠期為41天的豬胚胎背部皮膚組織，通過PCR定量檢測MSTRG.2162.1、sus?miR29a?5p或BMPR1b表達量，BMPR1b基因表達量低于2、或sus?miR29a?5p表達量高于30、或MSTRG.2162.1表達量低于10的判定為無毛豬。本發明提供的基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法可用于輔助無毛豬篩選育種，通過敲除BMPR1b，可以培育獲得無毛豬純合體。本發明篩選出影響毛囊基板生長的ceRNA，為人類遺傳性脫發疾病研究提供重要借鑒和動物模型，同時也提供了一種無毛性狀的分子標記和可供研究使用的大白豬無毛試驗群體，為人類遺傳性脫發，無發等疾病研究提供重要的豬無毛品系動物模型。

技術領域

本發明涉及基因檢測及育種技術領域，具體涉及一種基于ceRNA 表達量檢測豬無毛性狀的方法及其應用。

技術背景

人類對遺傳性脫發和稀發十分關注，毛囊形態結構和功能的穩定是毛發周期正常的關鍵。毛發的形成起源于胚胎期毛囊形態學的發育，但人類毛囊樣本，特別是胚胎期毛囊樣本的緊缺性和倫理性，制約了對胚胎期毛囊基板形態學和發育機制的深入研究。豬在醫學上具有重要意義，豬與人類遺傳同源性非常高，其基因組與人的基因組相似、復雜程度和染色體組成也較為一致。因此，豬作為醫學研究的理想模式動物，用來研究人類醫學問題。

無毛豬具有毛囊發育不全的特征，其軀體被毛稀疏，因此，可以以無毛豬作為研究人類毛發領域疾病的動物模型。但在無毛豬培育過程中，由于毛囊發育過程主要在胚胎期，而現有育種方法通常是采用對豬胚胎的性狀進行判定從而指導種豬的配種選育，但此時豬胚胎的毛囊中毛干并未伸出皮膚表層，憑肉眼無法直接判定該豬胚胎是否為無毛豬。目前的解決方法主要是通過對豬胚胎皮膚組織脫水固定形態，再進行組織形態學觀測來判定。現有方法存在豬胚胎皮膚組織難脫水固定，實驗操作復雜，耗時長等缺點。因此為了篩選可作醫學研究動物模型的無毛豬，需要有一種簡單、方便、有效的區分正常和無毛豬性狀的分子標記，以實現對無毛豬的精準鑒定。因此需要對影響豬毛囊發育的相關基因及其表達進行研究，目前尚無相關研究報道。

競爭性內源RNA(competing endogenous RNA，ceRNA)，是一種基于不同RNAs間的新的調節機制。近年來，miRNA、mRNA和lncRNA 之間的互作分析為復雜性狀的遺傳機制提供了一個全新的思路和視野。lncRNA/miRNA/mRNA聯合分析，已成為研究復雜性狀生物調控機制的趨勢和有效手段，其將會更準確的找到調控某一特定性狀的關鍵基因以及該基因的轉錄調控機制。

前期研究發現，無毛豬中存在ceRNA調控機制，通過多種mRNA、 miRNA和lncRNA相互作用，共同影響毛囊發育。此外篩選出可能導致無毛性狀產生的ceRNA(MSTRG.2162.1/Sus-miR29a-5p/BMPR1b)。目前還未有研究報道BMPR1b，Sus-miR29a-5p和MSTRG.2162.1可以通過ceRNA(MSTRG.2162.1/Sus-miR29a-5p/BMPR1b)調控機制影響毛囊生長，且尚無將這種ceRNAs用于檢測豬的無毛性狀，更沒有將 ceRNA作為分子標記物用于輔助無毛豬篩選育種的報道。

發明內容

為了解決以上問題，本發明提出一種基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法及其應用。