[發明專利]一種基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法及其應用

在審

• 申請號: 202111156963.7
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113755608A
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 丁向東;蔣堯;劉華濤;鄒全;李淑娟
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/113;C12N15/12;C12N15/85;C12N15/877;A01K67/027
• 代理公司: 北京專贏專利代理有限公司 11797
• 代理人: 李斌

1.一種基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法，其特征在于，所述ceRNA為MSTRG.2162.1、sus-miR29a-5p、BMPR1b其中之一；其中所述BMPR1b的基因序列表如SEQ IDNO:1所示；所述sus-miR29a-5p為調控BMPR1b表達的miRNA，其序列表如SEQ ID NO:2所示；所述MSTRG.2162.1為調控BMPR1b表達的lncRNA，其序列表如SEQ ID NO:3所示；所述方法為采集豬胚胎背部皮膚組織，通過PCR定量檢測并計算MSTRG.2162.1、sus-miR29a-5p或BMPR1b表達量，其中BMPR1b表達量低于2，或sus-miR29a-5p表達量高于30，或MSTRG.2162.1表達量低于10的判定為無毛豬。

2.根據權利要求1所述基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法，其特征在于，所述豬胚胎為懷孕母豬妊娠天數達到41天時進行流產獲得的。

3.根據權利要求1所述基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法，其特征在于，所述PCR定量檢測ceRNA表達量的步驟為：

S1、皮膚樣本mRNA提取：將豬胚胎背部皮膚組織在液氮中進行研磨至粉狀，稱取組織樣50-100mg加入1ml Trizol，然后進行勻漿處理，利用三氯甲烷、異丙醇、75％乙醇，無RNase水分別對組織中的蛋白質、DNA及無機鹽進行洗脫去除并對RNA沉淀濃縮獲得皮膚樣本mRNA；

S2、皮膚樣本mRNA純化及反轉錄：利用NanoDrop2000儀器對S1獲得的皮膚樣本mRNA濃度及純度進行檢測，利用1％瓊脂糖凝膠對RNA完整性進行檢測，利用反轉錄試劑盒進行RNA的純化和反轉錄；

S3、MSTRG.2162.1、sus-miR29a-5p或BMPR1b引物設計：在NCBI數據庫中獲取BMPR1b基因的mRNA序列信息，在轉錄組數據中提取MSTRG.2162.1或sus-miR29a-5p序列信息，并利用軟件設計引物。

S4、MSTRG.2162.1，sus-miR29a-5p或BMPR1b表達量檢測：使用Roche熒光定量試劑盒對BMPR1b進行PCR擴增，利用Roche LightCycler480熒光定量儀對MSTRG.2162.1、sus-miR29a-5p或BMPR1b表達量進行檢測；將測出的MSTRG.2162.1、sus-miR29a-5p或BMPR1b熒光信號Ct值轉化成表達量，轉化公式如下：

基因表達量＝2^-△△Ct；

S5、結果判定：對上述MSTRG.2162.1、sus-miR29a-5p或BMPR1b表達量進行判定，當BMPR1b表達量低于2，或sus-miR29a-5p表達量高于30，或MSTRG.2162.1表達量低于10的判定為無毛豬。

4.權利要求1所述基于ceRNA表達量檢測豬無毛性狀的方法在輔助無毛豬篩選育種中的應用。