[發明專利]一種非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202111137839.6
• 申請日: 2021-09-27
• 公開（公告）號: CN113687073B
• 公開（公告）日: 2023-10-27
• 發明（設計）人: 李鵬宇;張蕾;董春娜;李靜;于之清;宗樹成;王飛;劉新月;栗利芳;肖進;齊鵬
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

1.一種非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，包括酶聯反應板和酶標抗體；其中，所述酶聯反應板包被有非洲豬瘟病毒p54蛋白，酶標抗體為用酶標記的與非洲豬瘟病毒p54蛋白特異性結合的單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述非洲豬瘟病毒p54蛋白的序列為序列表中SEQ ID No.5序列。

3.根據權利要求1所述的非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：與非洲豬瘟病毒p54蛋白特異性結合的單克隆抗體含有重鏈可變區1H6-V_H和輕鏈可變區1H6-V_L；所述重鏈可變區1H6-V_H和輕鏈可變區1H6-V_L均由決定簇互補區和框架區組成；所述1H6-V_H和所述1H6-V_L的決定簇互補區均由CDR1、CDR2和CDR3組成；所述1H6-V_H的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第31～37位氨基酸所示；所述1H6-V_H的CDR2的氨基酸序列如SEQ IDNo.1的第52～70位氨基酸所示；所述1H6-V_H的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第103～109位氨基酸所示；所述1H6-V_L的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第24～38位氨基酸所示；所述1H6-V_L的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第54～60位氨基酸所示；所述1H6-V_L的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第93～102位氨基酸所示。

4.根據權利要求3所述的非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述1H6-V_H的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.1的第1～120位所示；其1H6-V_L的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No.2的第1～112位所示。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述酶聯反應板的獲得方法是將所述非洲豬瘟病毒p54蛋白溶于100μl的pH9.6的碳酸鹽溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶聯反應板，每孔0.1μg～1μg非洲豬瘟病毒p54蛋白，2～8℃下放置8～12小時，使包被抗原與酶聯反應板充分結合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS緩沖液，37℃封閉處理2～3小時，甩干后，待酶聯反應板干燥后4℃密封保存。

6.根據權利要求1所述的非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括底物液A、底物液B和終止液；所述底物液A為含0.6mg/ml過氧化氫尿素的檸檬酸磷酸鹽緩沖液，所述底物液B為0.2mg/ml的四甲基聯苯胺溶液，使用時兩者以1:1的比例混合；所述終止液為2mol/L的硫酸溶液。

7.根據權利要求1所述的非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括樣品稀釋液和20倍濃縮洗滌液；樣品稀釋液為含有5mg/ml酪蛋白的0.01M、pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液；濃縮洗滌液為含有體積百分濃度為0.8％～1.2％的Tween-20的0.01M，pH值為7.4的磷酸鹽緩沖液；

和/或，所述酶聯免疫試劑盒還包括陽性對照血清和陰性對照血清；所述陽性對照血清為用p54重組蛋白免疫后的豬血清；所述陰性對照血清為無豬偽狂犬病毒病原體且無疫苗接種的豬血清。

8.根據權利要求1～7所述的非洲豬瘟病毒p54阻斷ELISA抗體檢測試劑盒在制備檢測豬偽狂犬病毒感染或疫苗接種的待測樣品的試劑中的應用，其中，待測樣品為感染野毒株或應用過普通的弱毒疫苗、滅活疫苗或應用過非gE缺失疫苗豬只血清。