[發明專利]一種指導卵巢癌鉑耐藥患者用藥及療效評估的標志物、檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202111137834.3
• 申請日: 2021-09-27
• 公開（公告）號: CN113718034A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 吳令英;程海霞;梁磊磊
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院腫瘤醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 周新楣

本發明涉及生物醫學技術領域，尤其涉及一種指導卵巢癌鉑耐藥患者用藥及療效評估的標志物、檢測試劑盒及檢測方法。本發明提供了一種指導卵巢癌鉑耐藥患者用藥及療效評估的標志物。本發明基于ctDNA突變頻率對卵巢癌鉑耐藥患者的用藥及用藥療效進行預測，表現出了更低的檢測閾值，在患者CA125在正常范圍值內或CT評估困難時，仍可以檢出患者體內的微小殘留病灶，給予臨床醫師一定的指導意義。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，尤其涉及一種指導卵巢癌鉑耐藥患者用藥及療效評估的標志物、檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

卵巢癌是世界上第二大致死性婦科癌癥，其致死率在所有女性癌癥中排名第八，約有75％患者診斷時已經為晚期，她們的5年生存率低于30％。目前對于晚期患者來說，治療方法主要是手術治療，輔助以鉑類藥物為基礎的化療。但經過長期反復的鉑類藥物治療，幾乎所有的患者都會進展為鉑耐藥，考慮患者對藥物的耐受情況及再次選擇的化療藥物所帶來的毒副作用，對鉑耐藥后治療方案的選擇及對療效的及時評價顯得尤為重要。

對于卵巢癌患者，臨床常用影像學CT檢查及CA125評估病情指導治療，CA125是臨床公認的低靈敏度和特異度的檢測方法。鉑耐藥患者一般具有手術病史，無明顯可測量病灶，局限部位的CT檢查不能達到全面評估病情的目的，若多部位檢查CT則存在盲目性且經濟成本增加等問題。

ctDNA(circulating tumorDNA)，即循環腫瘤DNA，指存在于血液、腦脊液等體液中，是游離于細胞外的腫瘤DNA。ctDNA通常和血液中來源于正常細胞的游離DNA混雜在一起，被稱為cfDNA(cell free DNA)。微小殘留病灶(minimal residual disease，MRD)可以被定義為患者治療后仍然殘留在體內的病灶，這些殘留的微小病灶提示腫瘤細胞的持續存在，是疾病進展的主要原因，然而目前的醫學影像學或分子標志物等方式無法檢測到。自二代測序(next generation sequencing，NGS)成本不斷降低及生物信息學分析技術的完善，基于ctDNA的液體活檢技術在癌癥診治中應用逐漸成熟。

但是，目前尚沒有一種及時、準確、有效的監測卵巢癌鉑耐藥患者體內的微小殘留病灶的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種指導卵巢癌鉑耐藥患者用藥及療效評估的標志物，其可以及時、準確、有效的監測卵巢癌鉑耐藥患者體內的微小病灶，并表現出了更低的檢測閾值，給予臨床醫師一定的指導意義。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種指導卵巢癌鉑耐藥患者用藥及療效評估的標志物，所述標志物包括ctDNA的突變頻率。

優選的，通過Raceseq測序(見專利CN110669823A)檢測ctDNA的突變頻率。

本發明還提供了一種用于指導卵巢癌鉑耐藥患者用藥及療效評估的標志物的試劑盒，包括檢測血漿樣本中的ctDNA的突變頻率的試劑。

本發明還進一步的提供了一種檢測ctDNA的突變的方法，包括如下步驟：

(1)對腫瘤組織進行外顯子測序，獲得腫瘤組織標本中突變基因的信息；

(2)選取突變位點，對每個突變位點設計相應引物；

(3)提取血漿的cfDNA，進行甲基化建庫，然后進行Raceseq測序；

(4)分析Raceseq測序的測序結果獲得ctDNA的突變頻率。