[發(fā)明專(zhuān)利]一種抗磷脂綜合征相關(guān)蛋白包被磁珠的方法及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111137815.0
• 申請(qǐng)日: 2021-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115856307A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李安然;涂益;王嘉宇;吳霞
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 邁克生物股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 北京聿宏知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;馬環(huán)麗

本發(fā)明涉及一種抗磷脂綜合征相關(guān)蛋白包被磁珠的方法及其應(yīng)用。該方法在包被過(guò)程中采用的活化劑中包含EDC，且所述活化劑的用量為：活化劑中EDC的質(zhì)量與磁珠的質(zhì)量比為(4～32.4)μg:1mg。本發(fā)明所述方法通過(guò)控制活化劑中EDC的用量，使包被后的磁珠可以用于多個(gè)項(xiàng)目的使用，具有批間重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)；通過(guò)超聲處理包被后的磁珠，使包含包被后的磁珠工作液顆粒分散更均一、重復(fù)性好、批間和批次差異小。同時(shí)去除了封閉處理步驟，提高了試劑分析靈敏度，能夠較好地應(yīng)用在檢測(cè)抗磷脂綜合征相關(guān)抗體(抗β2糖蛋白I抗體和/或心磷脂抗體)中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗磷脂綜合征相關(guān)蛋白包被磁 珠的方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗磷脂抗體(Anti-phospholipids,APL)是一族針對(duì)自身抗原包括磷脂或帶負(fù)電荷磷脂與載體蛋白復(fù)合物的病理性抗體。抗磷脂抗體綜合癥(Anti-phospholipidsyndrome,APS)，是一種與抗磷脂抗體有關(guān)的自身免疫性疾病，典型的臨床表現(xiàn) 有動(dòng)脈靜脈血栓、血小板減少以及習(xí)慣性流產(chǎn)等。APS多見(jiàn)于年輕人，60％-80％ 為女性患者，女性中位年齡為30歲。APS可分為原發(fā)性APS(PAPS)和繼發(fā)性 APS(SAPS)，繼發(fā)性APS多見(jiàn)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)或類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(R A)等 自身免疫病。此外，還有一種少見(jiàn)的惡性APS(catastrophic APS)，表現(xiàn)為短期內(nèi) 進(jìn)行性廣泛血栓形成，造成多器官功能衰竭甚至死亡。

根據(jù)2006年《抗磷脂綜合征(APS)診斷分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)(修訂)國(guó)際共識(shí)》和2019年 中華醫(yī)師協(xié)會(huì)自身抗體檢測(cè)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)《抗磷脂抗體檢測(cè)的臨床應(yīng)用專(zhuān)家共識(shí)》， 抗心磷脂抗體(anti-cardiolipin antibody，aCL)、抗β2糖蛋白I抗體 (anti-Beta-2-Glycoprotein1antibody)是抗磷脂綜合征分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)中的重要實(shí)驗(yàn)室指 標(biāo)，目前臨床上廣泛應(yīng)用，已成為臨床實(shí)驗(yàn)室最為常見(jiàn)的自身抗體檢測(cè)項(xiàng)目。持 續(xù)中高梯度的IgG/IgM型抗心磷脂抗體與血栓密切相關(guān)，IgG型抗心磷脂抗體與 中晚期流產(chǎn)相關(guān)。β糖蛋白I是與心磷脂抗體結(jié)合的輔助因子，抗β2GPI抗體對(duì) 于抗磷脂綜合征的特異性可高達(dá)98％。

傳統(tǒng)檢測(cè)抗β2糖蛋白I抗體和心磷脂的方法為酶聯(lián)免疫法(ELISA)和基于羧 基磁珠或鏈霉親和素磁珠的化學(xué)發(fā)光法(CLIA)。然而酶聯(lián)免疫法精密度、靈敏度 線(xiàn)性均較差，不容易實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化；常規(guī)的羧基磁珠的化學(xué)發(fā)光法，包被效率低， 批間重復(fù)性差，容易聚團(tuán)，且不具備通用性。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種抗磷脂綜合征相關(guān)蛋白包 被磁珠的方法及其應(yīng)用。該方法通過(guò)控制活化劑中EDC的用量，使包被后的磁 珠可以用于多個(gè)項(xiàng)目的使用，具有批間重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)；通過(guò)超聲處理包被后的 磁珠，使包含包被后的磁珠工作液顆粒分散均一。同時(shí)去除了封閉處理步驟，提 高了試劑分析靈敏度。

為此，本發(fā)明第一方面提供了一種抗磷脂綜合征相關(guān)蛋白包被磁珠的方法， 其在包被過(guò)程中采用的活化劑中包含EDC，且所述活化劑的用量為：活化劑中 EDC的質(zhì)量與磁珠的質(zhì)量比為(4～32.4)μg:1mg，優(yōu)選為(20～32.4)μg:1mg。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述活化劑選自EDC-HCL、EDC-HCL和NHS 的混合物、以及EDC-HCL和硫代NHS的混合物中的任意一種。

在本發(fā)明的另一些實(shí)施方式中，包被過(guò)程采用的EDC-HCl的質(zhì)量與磁珠的 質(zhì)量比為(5～40)μg:1mg，優(yōu)選為(25～40)μg:1mg。

在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述方法包括如下步驟：

S1-1，將磁珠與偶聯(lián)緩沖液混合，獲得包含磁珠的混合液；

S1-2，將包含磁珠的混合液與待包被的抗磷脂綜合征相關(guān)蛋白混合，反應(yīng)后 制得產(chǎn)物混合物；