[發明專利]一種抗磷脂綜合征相關蛋白包被磁珠的方法及其應用

在審

• 申請號: 202111137815.0
• 申請日: 2021-09-27
• 公開（公告）號: CN115856307A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 李安然;涂益;王嘉宇;吳霞
• 申請（專利權）人: 邁克生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司 11372
• 代理人: 吳大建;馬環麗

1.一種抗磷脂綜合征相關蛋白包被磁珠的方法，其在包被過程中采用的活化劑中包含EDC，且所述活化劑的用量為：活化劑中EDC的質量與磁珠的質量比為(4～32.4)μg:1mg，優選為(20～32.4)μg:1mg；

進一步優選地，所述活化劑選自EDC-HCL、EDC-HCL和NHS的混合物、以及EDC-HCL和硫代NHS的混合物中的任意一種；更進一步優選地，包被過程采用的EDC-HCl的質量與磁珠的質量比為(5～40)μg:1mg，優選為(25～40)μg:1mg。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

S1-1，將磁珠與偶聯緩沖液混合，獲得包含磁珠的混合液；

S1-2，將包含磁珠的混合液與待包被的抗磷脂綜合征相關蛋白混合，反應后制得產物混合物；

S1-3，將產物混合物與活化劑混合，反應后制得包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠；

或者

S2-1，將磁珠與偶聯緩沖液混合，獲得包含磁珠的混合液；

S2-2，將包含磁珠的混合液與活化劑混合，反應后制得產物混合物；

S2-3，將產物混合物與待包被的抗磷脂綜合征相關蛋白混合，反應后制得包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠；

或者

S3-1，將磁珠與偶聯緩沖液混合，獲得包含磁珠的混合液；

S3-2，將包含磁珠的混合液與活化劑、待包被的抗磷脂綜合征相關蛋白混合，反應后制得包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括如下步驟：

將所述包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠進行超聲處理。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的方法，其特征在于，所述方法不包括使用封閉劑對所述包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠進行封閉處理的步驟。

5.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其特征在于，所述磁珠選自羧基磁珠、羥基磁珠、氨基磁珠和NHS磁珠中的至少一種，優選為羧基磁珠；和/或

所述偶聯緩沖液選自MES緩沖液、PBS緩沖液和HEPES緩沖液中的至少一種，優選為MES緩沖液；和/或

所述儲存緩沖液選自PBS緩沖液、Tris緩沖液、MES緩沖液和HEPES緩沖液中的至少一種，優選為PBS緩沖液。

6.根據權利要求1-5中任意一項所述的方法，其特征在于，所述待包被的抗磷脂綜合征相關蛋白的用量與磁珠的質量比為(5～40)μg:1mg；

優選地，所述待包被的抗磷脂綜合征相關蛋白為β2糖蛋白I或者β2糖蛋白I與心磷脂的混合物；進一步優選地，所述β2糖蛋白I與心磷脂的混合物中β2糖蛋白I與心磷脂的質量比為(1:4)～(4:1)；優選為1:1。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述方法，其特征在于，

步驟S1-2和步驟S2-2中，所述反應的溫度各自獨立地為20～30℃，所述反應的時間各自獨立地為15min～45min；和/或

步驟S1-3、步驟S2-3和步驟S3-2中，所述反應的溫度各自獨立地為20～30℃，所述反應的時間各自獨立地為2h～4h。

8.一種如權利要求1-7中任意一項所述的方法制得的包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠。

9.一種如權利要求8所述的包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠在檢測抗磷脂綜合征相關抗體中的應用；優選地，所述抗體為抗β2糖蛋白I抗體和/或抗心磷脂抗體。

10.一種檢測抗磷脂綜合征相關抗體的試劑盒，其包括如權利要求8所述的包被有抗磷脂綜合征相關蛋白的磁珠；

優選地，當所述抗磷脂綜合征相關蛋白為β2糖蛋白I時，所述試劑盒用于檢測抗β2糖蛋白I抗體；當所述抗磷脂綜合征相關蛋白為β2糖蛋白I與心磷脂的混合物時，所述試劑盒用于檢測抗心磷脂抗體。