[發明專利]一種用于鑒定中國荷斯坦牛乳房炎抗性的引物組合、方法及應用

在審

• 申請號: 202111136727.9
• 申請日: 2021-09-27
• 公開（公告）號: CN115074447A
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 俞英;達日格日樂;唐永杰;周月玲;文惠;李文龍;肖煒;張毅;任永紅;田茜茜;王景艷
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

本發明公開了一種用于鑒定中國荷斯坦牛乳房炎抗性的引物組合、方法及應用。該方法包括如下步驟：檢測待測中國荷斯坦牛基于SNP1位點(rs135854456)、SNP11位點(位于中國荷斯坦牛基因組第5號染色體的第104010752位)、SNP15位點(rs109421300)和SNP16位點(rs109350371)的基因型，如果基于SNP1位點的基因型為CC純合型、基于SNP11位點的基因型為CC純合型、基于SNP15位點的基因型為AA純合型且基于SNP16位點的基因型為AA純合型，待測中國荷斯坦牛具有乳房炎抗性。本發明提供的方法可以準確鑒定中國荷斯坦牛乳房炎抗性，具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種用于鑒定中國荷斯坦牛乳房炎抗性的引物組合、方法及應用。

背景技術

奶牛乳房炎即奶牛乳房發生的炎癥，其為奶牛乳腺最常見的疾病且屬于復雜疾病。奶牛乳房炎是乳腺組織發生的不同程度的病理學變化，其導致乳汁體細胞數(Somaticcell count，SCC)增多，牛奶產量和品質大幅度降低，對世界乳業發展影響巨大。一方面在實際飼養時，牛場通常通過檢測SCC對牛群乳房健康狀況進行管理，即SCC作為判斷奶牛乳房炎的間接指標(如健康牛的SCC為10萬/mL以下)，以控制牛奶質量，但利用SCC判斷奶牛乳房炎的標準并未統一，其判斷結果受環境影響也并不穩定準確。另一方面，傳統奶牛育種工作中，通常以低的體細胞評分(Somatic cell score，SCS)為育種目標間接提升奶牛乳房炎抗性，但此選擇方法取得的遺傳進展有限。因此，在規范用藥、大規模施行替抗、減抗養殖戰略的趨勢下，建立針對中國荷斯坦牛乳房炎抗性鑒定標準，對于提升奶牛生產性能，提高乳房炎抗性牛育種效率顯得尤為重要。

近年來，SNP作為第三代分子標記，以其數量多、分布廣、遺傳穩定等優點受到廣泛重視。基于中國荷斯坦牛的基因信息進行分析，可以挖掘更加穩定高效的SNP位點。因此，有必要探索基于基因多態性有效進行中國荷斯坦牛乳房炎抗性鑒定的方法。采用等位基因競爭性特異PCR法，可以開發其特異性引物，獲得樣本在SNP位點的基因型，最終針對中國荷斯坦牛乳房炎抗性進行鑒定。

發明內容

本發明的目的為鑒定中國荷斯坦牛乳房炎抗性。

本發明首先保護引物組合。所述引物組合可包括引物組1—引物組4；

所述引物組1由SEQ ID NO:1所示的正向引物01F1、SEQ ID NO:2所示的正向引物01F2和SEQ ID NO:3所示的反向引物01R組成；

所述引物組2由SEQ ID NO:4所示的正向引物02F1、SEQ ID NO:5所示的正向引物02F2和SEQ ID NO:6所示的反向引物02R組成；

所述引物組3由SEQ ID NO:7所示的正向引物03F1、SEQ ID NO:8所示的正向引物03F2和SEQ ID NO:9所示的反向引物03R組成；

所述引物組4由SEQ ID NO:10所示的正向引物04F1、SEQ ID NO:11所示的正向引物04F2和SEQ ID NO:12所示的反向引物04R組成。

上述引物組合中，所述正向引物01F1、所述正向引物02F1、所述正向引物03F1和所述正向引物04F1可進行FAM熒光標記。所述正向引物01F2、所述正向引物02F2、所述正向引物03F2和所述正向引物04F2可進行HEX熒光標記。

所述引物組合具體可由所述引物組1、所述引物組2、所述引物組3和所述引物組4組成。

上述任一所述引物組合在制備用于鑒定或輔助鑒定中國荷斯坦牛是否具有乳房炎抗性的試劑盒中的應用也屬于本發明的保護范圍。

上述任一所述引物組合在制備用于輔助篩查具有乳房炎抗性的中國荷斯坦牛的試劑盒中的應用也屬于本發明的保護范圍。