[發(fā)明專利]一種用于鑒定中國(guó)荷斯坦牛乳房炎抗性的引物組合、方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111136727.9
• 申請(qǐng)日: 2021-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN115074447A
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞英;達(dá)日格日樂;唐永杰;周月玲;文惠;李文龍;肖煒;張毅;任永紅;田茜茜;王景艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

1.引物組合，包括引物組1—引物組4；

所述引物組1由SEQ ID NO:1所示的正向引物01F1、SEQ ID NO:2所示的正向引物01F2和SEQ ID NO:3所示的反向引物01R組成；

所述引物組2由SEQ ID NO:4所示的正向引物02F1、SEQ ID NO:5所示的正向引物02F2和SEQ ID NO:6所示的反向引物02R組成；

所述引物組3由SEQ ID NO:7所示的正向引物03F1、SEQ ID NO:8所示的正向引物03F2和SEQ ID NO:9所示的反向引物03R組成；

所述引物組4由SEQ ID NO:10所示的正向引物04F1、SEQ ID NO:11所示的正向引物04F2和SEQ ID NO:12所示的反向引物04R組成。

2.如權(quán)利要求1所述引物組合，其特征在于：

所述正向引物01F1、所述正向引物02F1、所述正向引物03F1和所述正向引物04F1進(jìn)行FAM熒光標(biāo)記；

所述正向引物01F2、所述正向引物02F2、所述正向引物03F2和所述正向引物04F2進(jìn)行HEX熒光標(biāo)記。

3.權(quán)利要求1或2所述引物組合在制備用于鑒定或輔助鑒定中國(guó)荷斯坦牛是否具有乳房炎抗性的試劑盒中的應(yīng)用。

4.權(quán)利要求1或2所述引物組合在制備用于輔助篩查具有乳房炎抗性的中國(guó)荷斯坦牛的試劑盒中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1或2所述引物組合在輔助篩查具有乳房炎抗性的中國(guó)荷斯坦牛中的應(yīng)用；

所述應(yīng)用用于非疾病的診斷與治療。

6.權(quán)利要求1或2所述引物組合在鑒定或輔助鑒定中國(guó)荷斯坦牛是否具有乳房炎抗性中的應(yīng)用；

所述應(yīng)用用于非疾病的診斷與治療。

7.一種輔助篩查待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛是否具有乳房炎抗性的方法，包括如下步驟：檢測(cè)待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛基于SNP1位點(diǎn)、SNP11位點(diǎn)、SNP15位點(diǎn)和SNP16位點(diǎn)的基因型，然后進(jìn)行如下判斷：

如果待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛基于SNP1位點(diǎn)的基因型為CC純合型、基于SNP11位點(diǎn)的基因型為CC純合型、基于SNP15位點(diǎn)的基因型為AA純合型且基于SNP16位點(diǎn)的基因型為AA純合型，則待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛具有乳房炎抗性；

如果待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛基于SNP1位點(diǎn)的基因型為TT純合型和/或基于SNP11位點(diǎn)的基因型為TT純合型和/或基于SNP16位點(diǎn)的基因型為GG純合型和/或基于SNP15位點(diǎn)的基因型為GG純合型，則待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛不具有乳房炎抗性；

SNP1位點(diǎn)為rs135854456；

SNP11位點(diǎn)位于中國(guó)荷斯坦牛基因組第5號(hào)染色體的第104010752位；

SNP15位點(diǎn)為rs109421300；

SNP16位點(diǎn)為rs109350371；

所述方法用于非疾病的診斷與治療。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述檢測(cè)待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛基于SNP1位點(diǎn)、SNP11位點(diǎn)、SNP15位點(diǎn)和SNP16位點(diǎn)的基因型的步驟如下：

(1)以待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛的基因組DNA為模板，分別采用權(quán)利要求2所述引物組合中的引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

(2)完成步驟(1)后，采用儀器檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)，根據(jù)熒光信號(hào)的顏色獲得待測(cè)中國(guó)荷斯坦牛基于SNP1位點(diǎn)、SNP11位點(diǎn)、SNP15位點(diǎn)和SNP16位點(diǎn)的基因型。