[發(fā)明專利]一種基于CRISPR技術(shù)檢測甘薯病毒病的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202111136529.2
• 申請日: 2021-09-27
• 公開（公告）號: CN114015687A
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王麗梅;趙瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 舜豐生物科技（海南）有限公司;山東舜豐生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/70;C12Q1/6816;C12R1/94
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 王正君;徐迅

1.一種用于檢測甘薯褪綠矮化病毒的gRNA，所述gRNA包括與V型Cas蛋白結(jié)合的區(qū)域和與靶核酸雜交的導(dǎo)向序列，所述靶核酸為來源于甘薯褪綠矮化病毒的核酸；其特征在于，所述與靶核酸雜交的導(dǎo)向序列選自下組任意一種或其組合：

(1)所述與靶核酸雜交的導(dǎo)向序列含有17-30個堿基，并且與SEQ ID No.2所示的序列或其反向互補序列雜交，并且所述導(dǎo)向序列包含SEQ ID No.8-9任一所示的序列；

(2)所述與靶核酸雜交的導(dǎo)向序列包含SEQ ID No.8-9任一所示的序列，并且在SEQ IDNo.8-9任一所示的序列的3’端還包括1-13個堿基，并且，所述與靶核酸雜交的導(dǎo)向序列與SEQ ID No.2所示的序列或其反向互補序列雜交；

(3)所述與靶核酸雜交的導(dǎo)向序列與SEQ ID No.8-9任一所示的序列相比，在SEQ IDNo.8-9任一所示的序列的3’端連續(xù)缺失1-4個堿基；

(4)所述與靶核酸雜交的導(dǎo)向序列如SEQ ID No.8-9任一所示。

2.一種檢測/診斷甘薯褪綠矮化病毒或甘薯病毒病的方法，所述方法包括將待測核酸與V型Cas蛋白、權(quán)利要求1所述的gRNA和單鏈核酸檢測器接觸；檢測由Cas蛋白切割單鏈核酸檢測器產(chǎn)生的可檢測信號，從而檢測/診斷甘薯褪綠矮化病毒或甘薯病毒病。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括從待測樣品中獲得待測核酸的步驟。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述方法還包括采用引物對進行擴增獲得待測核酸的步驟。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述引物對選自如下i和/或ii：

i、引物對的上游引物如SEQ ID No.15所示，所述引物對的下游引物如SEQ ID No.16所示；

ii、引物對的上游引物如SEQ ID No.17所示，所述引物對的下游引物如SEQ ID No.16所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述樣品為來自植物或植物的傳毒介質(zhì)的樣品。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述可檢測信號可通過以下任一方式實現(xiàn)：基于視覺的檢測，基于傳感器的檢測，顏色檢測，基于金納米顆粒的檢測，熒光偏振，熒光信號，膠體相變，電化學(xué)檢測或基于半導(dǎo)體的檢測。

8.一種用于檢測或診斷待測植物是否感染甘薯褪綠矮化病毒的系統(tǒng)、組合物或試劑盒，所述系統(tǒng)、組合物或試劑盒包括V型Cas蛋白、權(quán)利要求1所述的gRNA和單鏈核酸檢測器。

9.一種檢測/診斷甘薯褪綠矮化病毒或者甘薯病毒病的系統(tǒng)、組合物或試劑盒，所述系統(tǒng)、組合物或試劑盒包括權(quán)利要求1所述的gRNA，所述系統(tǒng)、組合物或試劑盒還包括V型Cas蛋白以及單鏈核酸檢測器。

10.根據(jù)權(quán)利要求8-9任一所述的系統(tǒng)、組合物或試劑盒，其特征在于，所述系統(tǒng)、組合物或試劑盒包括權(quán)利要求5中的引物對。

11.權(quán)利要求8-10任一所述的組合物在診斷或檢測甘薯病毒病中的用途，或者在用于制備診斷或檢測甘薯病毒病的試劑或試劑盒中的用途。

12.權(quán)利要求8-10任一所述的組合物在檢測或診斷甘薯褪綠矮化病毒中的用途，或者在制備檢測或診斷甘薯褪綠矮化病毒的試劑或試劑盒中的用途。