[發(fā)明專利]一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法

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• 申請日: 2021-09-27
• 公開（公告）號: CN113604532A
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王朝輝
• 申請（專利權(quán)）人: 王朝輝
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
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本發(fā)明屬于膠原蛋白提取技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法，包括如下步驟：原料前處理，原料預(yù)處理，油水分離，酶解、滅酶，純化，濃縮，噴霧干燥成粉。本發(fā)明利用多酶復(fù)合酶解牦牛骨富含膠原蛋白肽的酶解液，在純化步驟中，先通過超濾紙超濾獲得小于1000Da的肽組分，再在低溫環(huán)境下將超濾液采用SP Sephadex C25陽離子交換柱純化，制得的牦牛骨膠原蛋白肽粉的分子量主要集中在500～1000Da，分子量為1000Da以下的膠原蛋白肽比例達(dá)到了90％以上，有效提高了牦牛骨膠原蛋白肽有效成分的提取率，有利于人體的吸收。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于膠原蛋白提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法。

背景技術(shù)

牦牛是高寒地區(qū)的特有牛種，是我國和世界稀有珍貴的地方類半野生特有種群，它生長在高寒缺氧、枯草期和冰封期長達(dá)半年左右的嚴(yán)峻自然條件下，生長在無污染的藍(lán)天、碧水和牧草茂盛的青藏高原，牧草中還生長著眾多有益的中草藥，牦牛自由地生長在海拔3500米以上綠色生態(tài)的安多大草原環(huán)境中，草場無重金屬殘留，純正、自然。在這樣的自然環(huán)境下生存的牦牛，不僅擁有發(fā)達(dá)的骨骼與肌腱運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)，而且是真正無污染的綠色產(chǎn)品，是特別優(yōu)質(zhì)的膠原提取寶庫。

與一般牛骨相比，因牦牛鮮骨骨骼密度大，骨質(zhì)優(yōu)良，骨骼中蘊(yùn)藏的膠原蛋白小肽量大，氨基酸含量高，是非常適合的小分子骨膠原肽的提取來源。牦牛骨膠原蛋白肽牦牛骨膠原蛋白肽，是從海拔3000米以上、天然牧養(yǎng)的牦牛骨中提取的優(yōu)質(zhì)活性骨膠原蛋白肽，是極易被人體吸收的小分子膠原蛋白肽。

膠原蛋白多肽是膠原蛋白或明膠經(jīng)蛋白酶水解的小分子蛋白質(zhì)，分子量一般約為10Da-10kDa。從結(jié)構(gòu)上講，膠原多肽是膠原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)徹底打開，肽鏈被降解為短鏈肽的多肽混合物。膠原蛋白肽一般由數(shù)量很少的氨基酸組成，市場上出現(xiàn)的常為寡肽或小肽產(chǎn)品，因其分子量小，具有易吸收的功效。此外，膠原蛋白肽具有一些特殊的活性功能，例如：免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抑菌、抗高血壓、抗衰老、預(yù)防與治療骨關(guān)節(jié)炎和骨質(zhì)疏松等作用。

施用膠原蛋白肽化合物已被證明在吸收循環(huán)后能夠在軟骨積累，該機(jī)制有助于飽受關(guān)節(jié)疾病折磨的關(guān)節(jié)病患者，其可作為促進(jìn)骨形成添加劑和骨健康基本補(bǔ)充劑。另外，由于傷口愈合過程中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的蛋白降解活性與肉芽組織合成和沉積膠原蛋白的細(xì)胞活性之間的平衡是必要的，因此許多新的基于膠原蛋白的傷口護(hù)理產(chǎn)品旨在減少過度的蛋白酶水平并使傷口環(huán)境恢復(fù)平衡。此外，這些膠原蛋白肽產(chǎn)品有助于促進(jìn)功能性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白來刺激愈合過程，研究顯示大甲鲹和紅牙魚或的骨骼中提取的I型膠原蛋白在傷口愈合中的療效進(jìn)行了研究，證實(shí)施用這些膠原蛋白的膜制劑對Wistar大鼠切除型傷口的愈合起到了促進(jìn)作用。

然而，當(dāng)今國內(nèi)市場上牛骨膠原蛋白肽與國外進(jìn)口骨膠原蛋白肽之間的品質(zhì)差距主要在于：1)國內(nèi)牛骨膠原蛋白肽中的小分子肽集中度不夠；2)國內(nèi)牛骨膠原蛋白肽產(chǎn)品色澤泛黃；3)國內(nèi)牛骨膠原蛋白肽產(chǎn)品的異味未能完全有效去除。造成這些問題的主要技術(shù)原因是分離純化工藝過于繁瑣或者過于簡陋，傳統(tǒng)工藝主要包括簡單過濾、膜過濾、離子交換、活性炭吸附等方法，在實(shí)際生產(chǎn)中，采用過于簡單的分離純化工藝會導(dǎo)致產(chǎn)品出現(xiàn)上述問題，采用過于繁復(fù)的分離純化工藝會導(dǎo)致生產(chǎn)成本過高且得率嚴(yán)重下降。因此，為解決上述問題，開發(fā)一種高效的牦牛骨膠原蛋白肽精制純化工藝是十分必要的。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，集中牛骨膠原蛋白肽中，去除牦牛骨中的異味，充分利用牦牛骨資源，本發(fā)明公開了一種以牦牛骨為原料，多酶復(fù)合酶解牦牛骨富含膠原蛋白肽的酶解液。該法利用SP Sephadex C25陽離子交換柱純化技術(shù)對牦牛骨膠原蛋白肽進(jìn)行純化，兼具了富集小分子肽、脫色、脫鹽和除異味的作用，是一種可顯著提高牦牛骨膠原蛋白肽品質(zhì)的生產(chǎn)方法。

本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)，一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法，包括如下步驟：

（1）原料前處理：用高壓冷水沖洗新鮮或冷凍的牦牛骨，以清除異物，再將清洗的牦牛骨投入絞碎機(jī)，壓碎至20-30mm大小，放置于清潔的容器中；