[發(fā)明專(zhuān)利]一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111133674.5
• 申請(qǐng)日: 2021-09-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113604532A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王朝輝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 王朝輝
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/06
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）原料前處理：用高壓冷水沖洗新鮮或冷凍的牦牛骨，以清除異物，再將清洗的牦牛骨投入絞碎機(jī)，壓碎至20-30mm大小，放置于清潔的容器中；

（2）原料預(yù)處理：加入牦牛骨質(zhì)量10～20倍的氫氧化鈉溶液浸泡3～6h，然后放入蒸煮罐中加入牛骨質(zhì)量8～12倍的水，在120～135℃下蒸煮1.5～3h，得到蒸煮液；

（3）油水分離：將所述蒸煮液進(jìn)行油水分離，去除油脂，得到牦牛骨粗膠原蛋白溶液；

（4）酶解：向牦牛骨膠原蛋白肽粗提液中加入復(fù)合蛋白酶進(jìn)行一次酶解，然后用檸檬酸調(diào)節(jié)一次酶解液的pH值至6～6.5后，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行二次酶解，并輔助超聲處理；酶解結(jié)束后，將酶解液煮沸20分鐘，使酶滅活，靜置冷卻至0～4℃；

（5）純化：超濾獲得小于1000Da的肽組分，將超濾液采用SP Sephadex C25陽(yáng)離子交換柱純化，洗脫液梯度：A液為0-1M NaCl溶液，用B液配制；B液為1M醋酸或醋酸鈉緩沖液，控制流速0.4Bv/h，上樣濃度4mg/mL，收集峰脊，即得牦牛骨膠原蛋白肽純化液；

（6）濃縮：牦牛骨膠原蛋白肽純化液溫度控制在80～82℃，在0.06～0.08Mpa真空度下，濃縮時(shí)間不超過(guò)30分鐘，濃縮至波美度20～22Bé，得牦牛骨膠原蛋白肽濃縮液；

(7)噴霧干燥：牦牛骨膠原蛋白肽濃縮液溫度45～50℃，波美度20～22Bé，噴霧塔進(jìn)風(fēng)溫度調(diào)節(jié)在150～160℃范圍，出風(fēng)溫度在80～90℃范圍，干燥成粉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述步驟（2）中添加的氫氧化鈉溶液的濃度為0.05～0.15mol/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）中復(fù)合蛋白酶為枯草桿菌蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中一種或幾種混合物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牦牛骨膠原蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟（4）中一次酶解的溫度為55℃～60℃，一次酶解時(shí)間為1h～2h，所述復(fù)合蛋白酶的添加量為粗膠原蛋白溶液質(zhì)量的0.8～1.6％；二次酶解時(shí)間為2h-4h，溫度為55℃～60℃，所述木瓜蛋白酶的加入量為粗膠原蛋白溶液質(zhì)量的0.1％～0.3％。