[發明專利]一種具有免疫調節活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202111133125.8
• 申請日: 2021-09-27
• 公開（公告）號: CN113817076A
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 李斌;曾冉華;高雄;張玉婷;吳吉莉;姚艷婷;黃倩茵
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A23L33/105;A23L33/125;A61K31/715;A61K36/07;A61P37/04
• 代理公司: 廣州藍晟專利代理事務所(普通合伙) 44452
• 代理人: 歐陽凱

1.一種具有免疫調節活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：該點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的主要重復單元的結構如下所示，重均分子量為150.75kDa：

2.根據權利要求1所述的一種具有免疫調節活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：所述點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的糖含量為94.84wt％。

3.根據權利要求1所述的一種具有免疫調節活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：所述點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1主要由摩爾比為2.4:28.2:1.0的甘露糖、葡萄糖和木糖組成。

4.根據權利要求1～3任一項所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)將粉碎過篩的點柄乳牛肝菌粉末脫脂處理，干燥后得到點柄乳牛肝菌脫脂粉末；

(2)向點柄乳牛肝菌脫脂粉末中加去離子水，提取多次，過濾后合并上清液，減壓濃縮，得濃縮液；

(3)濃縮液經分級醇沉、復溶沉淀、除蛋白、透析、冷凍干燥后獲得粗多糖凍干粉；

(4)取粗多糖凍干粉配置成粗多糖溶液，經離子交換柱分離洗脫，苯酚硫酸法測定，收集目標組分峰洗脫產物，經濃縮、透析、冷凍干燥后獲得SGP2組分；

(5)將SGP2組分經分子篩進一步分離，采用苯酚-硫酸法檢測多糖含量，收集目標組分峰洗脫產物，合并后的溶液經濃縮、透析、冷凍干燥后得到點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1。

5.根據權利要求4所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)具體按照以下步驟：將點柄乳牛肝菌子實體超微粉碎后過100目篩，得點柄乳牛肝菌粉末，按照料液比1g：20mL，向粉末中加入95vt％的乙醇，75℃提取2h，重復操作一次，過濾后收集沉淀并在60℃烘干，得到點柄乳牛肝菌脫脂粉末；

所述步驟(2)具體按照以下步驟：按照料液比1g：20-40mL，向點柄乳牛肝菌脫脂粉末中加去離子水，90℃提取2h，得水提液，重復操作2次，脫脂棉紗過濾后合并上清液，60℃減壓濃縮，得濃縮液；

所述步驟(3)具體按照以下步驟：向濃縮液中加入無水乙醇，使乙醇終濃度為30vt％，在4℃靜置3h沉淀不溶性多糖，以轉速6000r/min離心10min收集上清液；繼續往上清液中加入無水乙醇，使乙醇終濃度為80vt％，4℃下醇沉16h，在4℃以轉速6000r/min離心10min收集沉淀；將沉淀物溶解于去離子水中，得到多糖溶液；向多糖溶液中加入同等體積的Sevage試劑，所述Sevage試劑為體積比為4:1的氯仿-正丁醇混合液，傾入分液漏斗中劇烈震搖30min，在4℃以轉速6000r/min離心10min分層，取上清，重復除蛋白直到兩相分界處無白色絮狀物，并旋蒸去除有機溶劑；隨后將去除蛋白的多糖溶液采用3500Da透析袋透析72h，冷凍干燥得到粗多糖。

6.根據權利要求4所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制備方法，其特征在于：所述步驟(4)具體按照以下步驟：將粗多糖配制成濃度為25mg/mL的溶液，經DEAE-Sepharose fastflow離子交換柱分離，依次用濃度為0、0.1、0.2、0.3、0.5、1.0M的NaCl溶液洗脫，洗脫流速為2mL/min，洗脫時間為4min/管，使用全自動部分收集器收集，采用苯酚-硫酸法檢測多糖的含量，收集0.1M NaCl溶液洗脫組分，濃縮后采用3500Da透析袋透析72h，冷凍干燥得SGP2組分；

所述步驟(5)具體按照以下步驟：將SGP2組分配制成濃度為8mg/mL的溶液，經Sephacryl S-300 HR凝膠滲透柱分離純化，用0.1M NaCl溶液洗脫，洗脫流速為1mL/min，洗脫時間為8min/管，使用全自動部分收集器收集，采用苯酚-硫酸法測定多糖含量并繪制洗脫曲線，根據洗脫曲線收集第一個組分峰，再經濃縮、3500Da透析袋透析72h、冷凍干燥后得到點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1。

7.根據權利要求1～3任一項所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1在制備功能性食品及免疫調節劑藥物中的應用。