[發(fā)明專利]一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111133125.8 | 申請日： | 2021-09-27 |
| 公開（公告）號： | CN113817076A | 公開（公告）日： | 2021-12-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李斌;曾冉華;高雄;張玉婷;吳吉莉;姚艷婷;黃倩茵 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | C08B37/00 | 分類號： | C08B37/00;A23L33/105;A23L33/125;A61K31/715;A61K36/07;A61P37/04 |
| 代理公司： | 廣州藍晟專利代理事務(wù)所(普通合伙) 44452 | 代理人： | 歐陽凱 |
| 地址： | 510642 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 具有 免疫調(diào)節(jié) 活性 乳牛 多糖 sgp2 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：該點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的主要重復(fù)單元的結(jié)構(gòu)如下所示，重均分子量為150.75kDa：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：所述點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的糖含量為94.84wt％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具有免疫調(diào)節(jié)活性的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1，其特征在于：所述點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1主要由摩爾比為2.4:28.2:1.0的甘露糖、葡萄糖和木糖組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)將粉碎過篩的點柄乳牛肝菌粉末脫脂處理，干燥后得到點柄乳牛肝菌脫脂粉末；
(2)向點柄乳牛肝菌脫脂粉末中加去離子水，提取多次，過濾后合并上清液，減壓濃縮，得濃縮液；
(3)濃縮液經(jīng)分級醇沉、復(fù)溶沉淀、除蛋白、透析、冷凍干燥后獲得粗多糖凍干粉；
(4)取粗多糖凍干粉配置成粗多糖溶液，經(jīng)離子交換柱分離洗脫，苯酚硫酸法測定，收集目標組分峰洗脫產(chǎn)物，經(jīng)濃縮、透析、冷凍干燥后獲得SGP2組分；
(5)將SGP2組分經(jīng)分子篩進一步分離，采用苯酚-硫酸法檢測多糖含量，收集目標組分峰洗脫產(chǎn)物，合并后的溶液經(jīng)濃縮、透析、冷凍干燥后得到點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制備方法，其特征在于：所述步驟(1)具體按照以下步驟：將點柄乳牛肝菌子實體超微粉碎后過100目篩，得點柄乳牛肝菌粉末，按照料液比1g：20mL，向粉末中加入95vt％的乙醇，75℃提取2h，重復(fù)操作一次，過濾后收集沉淀并在60℃烘干，得到點柄乳牛肝菌脫脂粉末；
所述步驟(2)具體按照以下步驟：按照料液比1g：20-40mL，向點柄乳牛肝菌脫脂粉末中加去離子水，90℃提取2h，得水提液，重復(fù)操作2次，脫脂棉紗過濾后合并上清液，60℃減壓濃縮，得濃縮液；
所述步驟(3)具體按照以下步驟：向濃縮液中加入無水乙醇，使乙醇終濃度為30vt％，在4℃靜置3h沉淀不溶性多糖，以轉(zhuǎn)速6000r/min離心10min收集上清液；繼續(xù)往上清液中加入無水乙醇，使乙醇終濃度為80vt％，4℃下醇沉16h，在4℃以轉(zhuǎn)速6000r/min離心10min收集沉淀；將沉淀物溶解于去離子水中，得到多糖溶液；向多糖溶液中加入同等體積的Sevage試劑，所述Sevage試劑為體積比為4:1的氯仿-正丁醇混合液，傾入分液漏斗中劇烈震搖30min，在4℃以轉(zhuǎn)速6000r/min離心10min分層，取上清，重復(fù)除蛋白直到兩相分界處無白色絮狀物，并旋蒸去除有機溶劑；隨后將去除蛋白的多糖溶液采用3500Da透析袋透析72h，冷凍干燥得到粗多糖。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1的制備方法，其特征在于：所述步驟(4)具體按照以下步驟：將粗多糖配制成濃度為25mg/mL的溶液，經(jīng)DEAE-Sepharose fastflow離子交換柱分離，依次用濃度為0、0.1、0.2、0.3、0.5、1.0M的NaCl溶液洗脫，洗脫流速為2mL/min，洗脫時間為4min/管，使用全自動部分收集器收集，采用苯酚-硫酸法檢測多糖的含量，收集0.1M NaCl溶液洗脫組分，濃縮后采用3500Da透析袋透析72h，冷凍干燥得SGP2組分；
所述步驟(5)具體按照以下步驟：將SGP2組分配制成濃度為8mg/mL的溶液，經(jīng)Sephacryl S-300 HR凝膠滲透柱分離純化，用0.1M NaCl溶液洗脫，洗脫流速為1mL/min，洗脫時間為8min/管，使用全自動部分收集器收集，采用苯酚-硫酸法測定多糖含量并繪制洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線收集第一個組分峰，再經(jīng)濃縮、3500Da透析袋透析72h、冷凍干燥后得到點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～3任一項所述的點柄乳牛肝菌多糖SGP2-1在制備功能性食品及免疫調(diào)節(jié)劑藥物中的應(yīng)用。
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