[發明專利]磁微粒化學發光檢測試劑盒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202111131194.5
• 申請日: 2021-09-26
• 公開（公告）號: CN113933521A
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發明（設計）人: 朱明月;張追峰;張稱意;陳志瓊;朱撮絲
• 申請（專利權）人: 北京貝爾醫療設備有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/533;G01N21/76
• 代理公司: 北京悅和知識產權代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春;劉青霞

1.一種磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，包括Anti-FITC羊多抗包被的磁珠、ALP標記的第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體、FITC標記的第二胃泌素釋放肽前體單克隆抗體、含有ProGRP重組抗原的標準品；

其中，所述第一、第二胃泌素釋放肽前體單克隆抗體為識別ProGRP抗原分子不同表位的單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，ALP標記的第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體中，

ALP通過SMCC橋聯到第一胃泌素釋放肽前體抗體上；

可選地，每1重量份的第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體用0.9重量份的ALP標記；

可選地，所述第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體先進行活化再加入ALP和SMCC橋連；

可選地，所述第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體采用Traut’s Reagent溶液和甘氨酸溶液活化；

可選地，還含有稀釋液，ALP標記的第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體通過稀釋液稀釋后的濃度為0.1μg/mL。

3.根據權利要求2所述的磁微?；瘜W發光檢測試劑盒，其特征在于，所述第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體的活化方法為：取第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體至離心濃縮管中加入緩沖液，離心濃縮至2.5～3.5mg/mL，取至EP管中，加入活化劑Traut’s Reagent溶液，室溫靜置反應，加入的甘氨酸溶液，室溫靜置反應；除去未反應的活化劑，收集活化后的抗體，濃度調整為3mg/mL；可選地，通過PD10柱純化去除未反應的活化劑；

可選地，Traut’s Reagent溶液的濃度為5mg/mL；可選地，甘氨酸溶液的濃度為0.1moL/L；可選地，每1mg第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體對應的所述Traut’s Reagent溶液的加入量為18～25μL；可選地，每1mg第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體對應的所述甘氨酸溶液的加入量為45～60μL；

可選地，加入活化劑后室溫靜置反應的時間為20min；可選地，加入甘氨酸溶液后室溫靜置反應的時間為5min；可選地，緩沖液為pH9.0的0.2M NaHCO₃。

4.根據權利要求2或3所述的磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，橋連方法為：將ALP溶液與SMCC溶液室溫靜置反應，去除多余的SMCC，收集活化后的ALP，與活化后的第一胃泌素釋放肽前體單克隆抗體在2-8℃條件下靜置反應獲得偶聯物，濃縮再稀釋，作為試劑2號試劑；可選地，室溫靜置反應時間為25～35min，可選地為30min，可選地，2-8℃條件下靜置反應時間為18～22h，可選地為20h，可選地，SMCC溶液的濃度為10mg/mL；可選地，稀釋液為校準品稀釋液；可選地，試劑2號試劑的濃度為0.1～0.8μg/mL，可選地為0.1μg/mL；可選地，偶聯物溶液通過Supperdex200凝膠純化。

5.根據權利要求1至4任一所述的磁微?；瘜W發光檢測試劑盒，其特征在于，FITC標記的第二胃泌素釋放肽前體單克隆抗體中，每1重量份的第二胃泌素釋放肽前體單克隆抗體用0.075重量份的FITC標記；

可選地，FITC標記第二胃泌素釋放肽前體單克隆抗體的方法為：將FITC、第二胃泌素釋放肽前體單克隆抗體分別加入緩沖液制得溶液，將兩種溶液混合反應，濃縮再稀釋，作為試劑1號試劑；可選地緩沖液采用pH9.0的0.2M NaHCO₃；可選地，FITC溶液濃度為0.5mg/mL，可選地，第二胃泌素釋放肽前體單克隆抗體溶液的濃度為3mg/mL；可選地，稀釋液為校準品稀釋液；可選地，通過PD10柱純化去除未反應的FITC；試劑1號試劑的濃度為0.1～1.0μg/mL，可選地為0.5μg/mL。

6.根據權利要求1至5任一所述的磁微?；瘜W發光檢測試劑盒，其特征在于，Anti-FITC羊多抗包被的磁珠中，每100重量份的裸磁珠用1重量份Anti-FITC抗體包被；可選地，所述裸磁珠先用EDC室溫活化再加入Anti-FITC抗體包被；可選地，裸磁珠的質量百分數為0.5％，磁珠的粒徑為3μm；可選地，Anti-FITC抗體包被磁珠的濃度為0.5mg/mL。