[發明專利]同時檢測HBA1/2、HBB和HBD基因位點多種突變的方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202111125878.4
• 申請日: 2021-09-26
• 公開（公告）號: CN113564248A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 李佳琪;盧玉林;謝田田;毛愛平;任志林
• 申請（專利權）人: 北京貝瑞和康生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;袁森

1.一種用于同時擴增HBA1/2、HBB和HBD基因突變的引物組，其特征在于，所述引物組包括：

1）HBA正向引物，選自以下的一個或多個：HBA-F1、HBA-F2、HBA-F3、HBA-F4、HBA-F5；

2）HBA反向引物，選自以下的一個或多個：HBA-R1、HBA-R2；

3）HBBD正向引物，選自以下的一個或多個：HBBD-F1、HBBD-F2、HBBD-F3、HBBD-F4、HBBD-F5、HBBD-F6、HBBD-F7、HBBD-F8、HBBD-F9；和

4）HBBD反向引物，選自以下的一個或多個：HBBD-R1、HBBD-R2、HBBD-R3；

其中所述引物在基因組上的位置如下表所示：

。

2.根據權利要求1所述的引物組，其中所述引物組包括權利要求1中所述的19條引物。

3.根據權利要求2所述的引物組，其中所述引物組中引物序列如下所示：

。

4.根據權利要求2所述的引物組，其中所述引物在5’端加上5-50nt不同序列的DNA，即Barcode，用于區分不同樣本。

5.一種試劑盒，其能夠同時檢測HBA1/2、HBB和HBD基因位點多種突變，所述試劑盒包括以下試劑：

（1）用于多重PCR擴增HBA1/2、HBB和HBD基因片段的試劑；和

（2）用于構建三代測序文庫的試劑；

其中，所述用于多重PCR擴增的試劑包括權利要求1-4任一項所述的引物組。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中所述的突變至少包括以下的一種或多種：

HBA1/2基因位點上引物范圍內所有點突變；

表示所示的30種大片段缺失；

選自αααanti3.7，αααanti4.2，HKαα，antiHKαα；ααααanti3.7和ααααanti4.2的6種結構變異；

HBB和HBD基因位點上引物范圍內所有點突變；

表2所示的28種大片段缺失；和

選自Hb Anti-Lepore和Hb Miyada的2種結構變異。

7.根據權利要求5所述的試劑盒，其中所述多重PCR擴增在單反應管中完成。

8.根據權利要求5所述的試劑盒，其中所述試劑盒用于檢測HBA1/2、HBB和HBD基因的不同突變是否連鎖。

9.根據權利要求5所述的試劑盒，其中所述用于多重PCR擴增的試劑還包括DNA聚合酶、反應緩沖液。

10.根據權利要求5所述的試劑盒，其中所述三代測序選自Pacific Biosciences公司的PacBio測序或Oxford Nanopore Technologies（ONT）的Nanopore測序。

11.根據權利要求5所述的試劑盒，其中所述用于構建三代測序文庫的試劑包括末端修復酶、接頭、連接酶、DNA純化磁珠、反應緩沖液和外切酶。