[發明專利]一種新型冠狀病毒多肽高效偶聯技術及其應用

在審

• 申請號: 202111119260.7
• 申請日: 2021-09-24
• 公開（公告）號: CN113721016A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 陳澤良;易懷敏;陸家海;張力華
• 申請（專利權）人: 深圳藍韻生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 深圳至誠化育知識產權代理事務所(普通合伙) 44728
• 代理人: 劉英

本發明公開了一種新型冠狀病毒多肽高效偶聯技術及其應用，包括間接ELISA法，所述間接ELISA法包括以下操作步驟：S1：采用間接ELISA法，血清樣品中的SARS?CoV?2抗體與固定在ELISA板的SARS?CoV?2抗原物質結合，洗滌除去非結合的抗原及雜質，再加入酶標二抗。通過加入與酶反應的底物后顯色，根據酶標儀OD450值可以判斷樣品中抗體的含量。本發明所述的一種新型冠狀病毒多肽高效偶聯技術及其應用，利用生物素?鏈霉親和素反應系統使抗原多肽定向高效偶聯到固相載體上，減少抗原的損耗，使免疫檢測方法更高效快捷、成本更低。

技術領域

本發明涉及新型冠狀病毒多肽高效偶聯技術領域，特別涉及一種新型冠狀病毒多肽高效偶聯技術及其應用。

背景技術

新型冠狀病毒感染引發的新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)疫情發展迅速，且確診病例數不斷增加。基于COVID-19的強傳染性，快速地篩查臨床癥狀病例及疑似病例，并及時進行隔離被認為是疫情防控的有效手段。

在現有的針對SARS-CoV-2的實驗室檢測方法，血清抗體檢測方法具有樣本采集方便、操作簡單的特點，是快速篩查和核酸輔助診斷的重要方法。目前針對SARS-CoV-2的特異性抗體檢測技術主要有膠體免疫層析法、酶聯免疫吸附法(ELISA)、化學發光法。

膠體免疫層析法操作簡單、報告時間快，適用于快速篩查，但其檢測靈敏度和準確度較化學發光法和酶聯免疫吸附試驗低；ELISA和化學發光法均有特異性強、靈敏度高的特點，在化學發光法的實際應用中常見的為磁微粒化學發光免疫分析法，其更具穩定性。ELISA、磁微粒化學發光免疫分析法可用于新型冠狀病毒中和抗體的批量、快速檢測，在臨床檢測中具有良好的發展前景。

生物素-親合素系統是一種新型生物反應放大系統，廣泛應用于各種標記免疫分析技術。1個親合素分子可結合4個生物素化分子，且結合親和力極強、特異性高、穩定性好，是BAS多級放大作用的物質基礎。鏈霉親合素是一種與親和素有相似生物學特性的大分子蛋白，其與固相材料的非特異性結合少于親合素，故在實際應用中多采用生物素-鏈霉親合素系統。

活化生物素可與多種生物活性分子及示蹤物結合形成生物素化衍生物，而鏈霉親合素可連接示蹤物(如酶、熒光素等)、固相載體(如磁顆粒)等。通過與示蹤物牢固結合及多級放大效應，極大地提高了免疫檢測和分析的敏感性。

在ELISA、磁微粒化學發光免疫分析法中引入生物素-鏈霉親合素系統，將鏈霉親合素連接于固相載體表面，與生物化抗原結合，實現間接包被，可增加抗原包被數量，減少空間位阻效應，極大地提高了基于免疫方法的檢測效率，更省時省材。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種新型冠狀病毒多肽高效偶聯技術及其應用，可以有效解決背景技術中的問題。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種新型冠狀病毒多肽高效偶聯技術，包括間接ELISA法，所述間接ELISA法包括以下操作步驟：

S1：采用間接ELISA法，血清樣品中的SARS-CoV-2抗體與固定在ELISA板的SARS-CoV-2抗原物質結合，洗滌除去非結合的抗原及雜質，再加入酶標二抗。通過加入與酶反應的底物后顯色，根據酶標儀OD450值可以判斷樣品中抗體的含量；

S2：相關試劑配制；

a1：封閉液，優選0.5％BSA的PBS液，0.22μm濾器過濾除菌，保存于4℃；

a2：洗滌液PBST，優選0.5％Tween20，PBS液，震蕩混勻，室溫保存；

a3：0.05mMCBBuffer，4.77gNa2CO3+8.82gNaHCO3，加入2L雙蒸水充分攪拌；