[發(fā)明專利]單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體及免疫磁珠和用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111116748.4
• 申請(qǐng)日: 2021-09-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115851609A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈燕濤;王莉;張明陽(yáng);錢韋;王娟;武瑤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/12;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543;C12R1/91
• 代理公司: 北京潤(rùn)平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 嚴(yán)政

1.單核細(xì)胞增生李斯特菌P60蛋白雜交瘤細(xì)胞株12A5H5F8，其特征在于，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.23021。

2.一種單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體，其特征在于，是由保藏編號(hào)為CGMCCNo.23021的單核細(xì)胞增生李斯特菌P60蛋白雜交瘤細(xì)胞株12A5H5F8產(chǎn)生的。

3.權(quán)利要求2所述的單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體的用途，其特征在于，它被用于檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特菌，所述用途用于非疾病診斷目的。

4.一種單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體免疫磁珠，其特征在于，由納米磁珠和權(quán)利要求2所述的單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體通過(guò)偶聯(lián)得到。

5.一種單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體免疫磁珠的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

b1：將權(quán)利要求2所述的P60單克隆抗體與活化的納米磁珠進(jìn)行混合，接著加入pH＝6的MES緩沖液進(jìn)行混合，然后置于旋轉(zhuǎn)混合器上室溫反應(yīng)1h，接著置于磁力架上進(jìn)行磁分離并移除上清；

b2:向步驟b1中磁分離得到的下層物料中加入含牛血清白蛋白的硼酸鹽吐溫溶液并且重懸磁珠，置于混勻儀上于37℃封閉；然后置于磁力架上磁分離并移除上清，接著用PBS緩沖液進(jìn)行洗滌。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述活化的過(guò)程包括如下步驟：

a1：采用一水嗎啉乙磺酸吐溫溶液對(duì)納米磁珠進(jìn)行洗滌，然后置于磁力架進(jìn)行磁分離后吸出上清；

a2：用一水嗎啉乙磺酸溶液分別配制碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺溶液。然后向步驟a1中洗滌后的納米磁珠中加入碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺溶液，并在室溫下攪拌；然后將混合物置于磁力架上磁分離移除上清，并加入一水嗎啉乙磺酸溶液進(jìn)行洗滌，然后置于磁力架磁分離，得到活化的納米磁珠。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟a1中，所述納米磁珠的粒徑為201.1-340.9nm。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟b1中，P60單克隆抗體的濃度為2.5-3.5mg/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在步驟b1中，所述活化的納米磁珠與P60單克隆抗體的重量比為1:0.008-0.01。

10.一種用于檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特菌的免疫磁珠試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有權(quán)利要求4所述的單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體免疫磁珠或由權(quán)利要求5-9中任意一項(xiàng)所述的方法制備的單核細(xì)胞增生李斯特菌P60單克隆抗體免疫磁珠。